[发明专利]一种对单根毛发进行DNA分型的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物化学领域，尤其涉及一种对单根毛发进行DNA分型的方法。

背景技术

毛发是法医学常用的检测材料之一，在凶杀、强奸、盗窃等多种形式的刑事案件中常常作为重要的物证出现，所以寻求简便快速的方法对毛发进行DNA分型，是法医物证检验中的一大任务。毛发DNA含量极少，新拔毛发发根中含有约0.5ug总DNA,自然脱落的毛发毛根中含有的DNA量更少，由于各种复杂的现场环境，在大多数现场中毛发属于微量检材，些许DNA损失就可能导致DNA分型的失败。

现有技术中在毛发中提取DNA的方法有：Chelex-100法、DTT-TKM法、二硫苏糖醇（DTT）裂解液法、PCR缓冲液配制毛囊裂解液提取法、SDS-蛋白酶k法配制裂解液提取法、改良的碱性裂解法提取；等提取方法。但是如图1所示，Chelex-100法、DTT-TKM法、PCR缓冲液配制毛囊裂解液提取法、SDS-蛋白酶k法配制裂解液提取法提取单根毛发难获得完整分型；如图2所示，二硫苏糖醇（DTT）-裂解液法提取单根毛发DNA，虽能获得完整分型，但是峰高较低，RFU值只能达到50～100。而且现有技术中，上述各种提取方法都需要先将单根毛发进行多个步骤的预处理，制成PCR模板，再放入PCR仪中进行扩增，预处理过程复杂、需要不断提取试剂，毛发中DNA容易损失、且需要成本较高、耗时较长，单根毛发成功分型率较低。

发明内容

本发明的目的是提供一种对单根毛发进行DNA分型的方法，在PCR仪中一步实现毛发的处理和DNA的复制，操作简单，避免了提取过程中试剂的来回转移而导致的DNA损失，使提取出的DNA得到高效利用。

为了解决上述问题，本发明提供的一种对单根毛发进行DNA分型的方法是这样实现的：

一种对单根毛发进行DNA分型的方法，包括：取单根毛发的毛根和PCR反应组分放入PCR仪中进行PCR扩增；

将PCR扩增的产物进行电泳分型。

可选的，所述PCR扩增的反应体系为10.2ul，所述PCR反应组分为：MasterMix8.5ul，Primer1.5ul，Taq(5U/ul)0.2ul。

可选的，所述PCR的循环参数为：预变性95℃20min，32循环×（94℃1min，59℃1min，72℃1min）或34循环×（94℃1min，59℃1min，72℃1min），60℃60min，4℃保温。

可选的，所述单根毛发为毛根带有毛囊的毛发。

可选的，所述单根毛发的长度为近毛根毛囊处4～6mm。

本发明提供的对单根毛发进行DNA分型的方法，单根毛发和PCR反应组分一起放入到PCR仪中进行PCR扩增，相对于现有技术中先对单根毛发进行多个步骤的预处理，制成PCR模板，再放入PCR仪中进行扩增，本发明操作简单，不需要试验中反复提取试剂，减少毛发中DNA的损耗，而且成本低，时间短，单根毛发成功分型率高。

附图说明

图1是现有技术中采用Chelex-100法提取的单根毛发DNA经过PCR扩增后进行的电泳图；

图2是现有技术中采用二硫苏糖醇（DTT）-裂解液法提取的单根毛发DNA经过PCR扩增后进行的电泳图；

图3是本发明提供的方法提取的单根毛发DNA经过PCR扩增后进行的电泳图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

取近毛根带有毛囊的单根毛发4～6mm，带有毛囊的一端浸入PCR反应组分中，一起放入到PCR仪中进行PCR扩增。本发明PCR反应组分为：MasterMix8.5ul，Primer1.5ul，Taq(5U/ul)0.2ul；PCR扩增的反应体系为10ul；PCR的循环参数为：预变性95℃20min，32循环×（94℃1min，59℃1min，72℃1min）或34循环×（94℃1min，59℃1min，72℃1min），60℃60min，4℃保温。

如表一所示，是本发明分别采用25ul、15ul、10ul和8ul的反应体系的结果比较。