[发明专利]用金属有机配合物对葡萄糖进行比色检测的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医学检测领域，涉及一种用金属有机配合物对葡萄糖进行比色检测的方法。

背景技术

葡萄糖是重要的生物分子，其在血液中的含量是人体健康程度的指示剂。因此，葡萄糖含量的快速、准确检测对于监测人体健康程度（区别健康与亚健康）、对某些疾病，如糖尿病等做出早期预警及诊断都具有重要意义

葡萄糖的检测方法主要是电化学方法，如中国发明专利（200910067282）报道了一种基于镍纳米粒子/碳纤维复合材料的非酶电化学葡萄糖传感器，中国发明专利（200810124404.6）公开了一种基于管状金属材料的非酶电化学生物传感器。电化学传感器的检测灵敏度高，但是易受干扰，而且检测需要过程需要消耗一定的能量。比色检测是近年来兴起的一种检测方法，它利用反应体系颜色及色度的变化实现对目标物的检测。由于可以用肉眼直接观测比色检测的结果，因此比色检测方法具有结果直观、操作简单等特点。比色法已经成功的用于检测DNA、蛋白以及有害重金属离子等。一些金属纳米粒子、金属氧化物已经被用于比色检测葡萄糖。虽然这些材料表现出很好的葡萄糖检测性能，但是缺点也很明显。比如，贵金属纳米粒子成本高，难以推广。金属氧化物的反应活性较低，检测时间长。因此，需要寻找新的材料克服上述材料的缺点，推动葡萄糖比色检测的市场化发展。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种快速、准确、低成本的用金属有机配合物对葡萄糖进行比色检测的方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种用金属有机配合物对葡萄糖进行比色检测的方法，包括如下步骤：

（1）配制浓度为1μM～饱和的可变价金属的无机盐溶液为溶液Ⅰ；

（2）配制浓度为1μM～饱和的2-甲基咪唑溶液为溶液Ⅱ或浓度为1μM～饱和的4,4’-联吡啶溶液为溶液Ⅱ；

所述溶液Ⅰ和溶液Ⅱ的溶剂为水、甲醇或乙醇；

（3）将溶液Ⅰ和溶液Ⅱ按体积比为1:100～100:1的比例混合，制成金属有机配合物溶液；

（4）将10～50微升浓度为20毫克/毫升的葡萄糖氧化酶水溶液加入到200微升待测葡萄糖样品中，用0.02M pH值为6～8的缓冲溶液稀释至500微升，在37℃培养15～60分钟，加入2～100微升浓度为50毫摩尔/升的过氧化物酶色源底物的二甲基亚砜溶液与10～100微升所述金属有机配合物溶液，用0.2M pH值为2～4的缓冲溶液稀释至1毫升，得到溶液A，测定溶液A在可见光区的吸光光度值，比色检测出葡萄糖的浓度。

另一种用金属有机配合物对葡萄糖进行比色检测的方法，包括如下步骤：

（1）配制浓度为1μM～饱和的可变价金属的无机盐溶液为溶液Ⅰ；

（2）配制浓度为1μM～饱和的2-甲基咪唑溶液为溶液Ⅱ或浓度为1μM～饱和的4,4’-联吡啶溶液为溶液Ⅱ；

所述溶液Ⅰ和溶液Ⅱ的溶剂为水、甲醇或乙醇；

（3）将溶液Ⅰ和溶液Ⅱ按体积比为1:100～100:1的比例混合，制成金属有机配合物溶液；

（4）用下述两种方法之一种制备金属有机配合物薄膜：

方法一：将步骤（3）获得的金属有机配合物溶液中的所述金属有机配合物收集、烘干、压制成膜；

方法二：在固体基底材料表面原位生长金属有机配合物薄膜，步骤为：

a将固体基底材料浸泡于0.1～2mg/mL聚乙烯吡咯烷酮水溶液中1分钟～1天，使所述固体基底材料表面吸附聚乙烯吡咯烷酮分子；

b将步骤a制备的材料反复依次浸泡于所述步骤（1）获得的溶液I中1分钟～1小时和步骤（2）获得的溶液II中1分钟～1小时；在固体基底材料表面原位生长出金属有机配合物薄膜，直到金属有机配合物薄膜的厚度为0.5～10μm为止；

（5）将10～50微升浓度为20毫克/毫升的葡萄糖氧化酶水溶液加入到200微升待测葡萄糖样品中，用0.02M pH值为6～8的缓冲溶液稀释至500微升，在37℃培养15～60分钟，加入2～100微升浓度为50毫摩尔/升的过氧化物酶色源底物的二甲基亚砜溶液，用0.2M pH值为2～4的缓冲溶液稀释至1毫升，得溶液B；

（6）取1～100微升溶液B滴在所述金属有机配合物薄膜的表面，放置5～15分钟，观察液滴颜色，比色检测出葡萄糖的浓度。

所述可变价金属为铁、铜、金或银。

所述无机盐为盐酸盐、硫酸盐或硝酸盐；