[发明专利]一种短小芽孢杆菌漆酶基因及其表达与应用

权利要求书

1.一种短小芽孢杆菌漆酶基因，其特征在于其核苷酸序列如以下1）或2）所示：

1）其核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列；

2）在1）限定的核苷酸序列基础上经碱基的缺失、取代、插入或突变而成且具有编码有活性的漆酶的核苷酸序列。

2.权利要求1所述基因编码的蛋白质。

3.含有权利要求1所述基因的转基因细胞系。

4.含有权利要求1所述基因的基因工程菌。

5.含有权利要求1所述基因的表达载体或克隆载体。

6.根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，优选重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)。

7.一种权利要求6所述生产漆酶的重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于，选取大肠杆菌冷休克表达载体pColdII，构建重组表达载体pColdII-cotA，以大肠杆菌E.coli BL21(DE3)为宿主进行表达。

8.一种权利要求6所述生产漆酶的重组大肠杆菌生产漆酶的方法，其特征在于，利用IPTG对重组菌产漆酶进行诱导表达，诱导表达后，超声破碎菌体，利用Ni⁺柱亲和层析法纯化得到可溶性漆酶，咪唑洗脱浓度为500mM；所述诱导表达条件为将含重组表达质粒pColdII-cotA的大肠杆菌BL21(DE3)在37°C、250rpm条件下培养至OD₆₀₀=0.5，随后转入15°C培养并加入终浓度为0.1mM的IPTG，诱导表达24h，转速160rpm；培养基成分为：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L，pH7.4。

9.权利要求1所述基因在印染废水脱色中的应用。