[发明专利]一种凝结芽孢杆菌孢子的生产方法及其应用

权利要求书

1.一种凝结芽孢杆菌孢子的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1. 菌株诱变：称取1-10 mg 亚硝基胍于培养皿中，加入丙酮助溶，加入灭菌的0.1 mol/L的磷酸缓冲液9 mL，搅拌至亚硝基胍溶解，吸取1 mL的凝结芽孢杆菌营养体菌悬液放入培养皿中开始诱变；

S2. 菌株的筛选：吸取0.2mL的菌液涂布到pH3.0-8.0的蛋白胨培养基中；30-50℃下培养40-56小时；然后将平板上的耐酸耐高温的单菌落转入试管斜面继续培养，然后再分别摇瓶培养，选取生长量最高的突变株；

S3. 突变株的试管斜面培养：将突变株放入试管内培养基中倾斜置于生化培养箱静置培养28h以上；

S4. 菌株的发酵培养，将经斜面培养后的菌株置于发酵培养基中培养。

2.根据权利要求1所述的凝结芽孢杆菌孢子的生产方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述培养基按质量百分比由以下组分组成：牛肉膏 0.1-0.5%；蛋白胨 0.1-1%；NaCl 0.1-1%；葡萄糖 0.1-0.5%；硫酸锰，0.003-0.005%；pH值控制在6.5-8.0。

3.根据权利要求2所述的凝结芽孢杆菌孢子的生产方法，其特征在于，所述步骤S3中，培养温度为30-50℃。

4.根据权利要求1所述的凝结芽孢杆菌孢子的生产方法，其特征在于，所述步骤S4中，所述发酵培养基由以下组份溶于1L水：玉米淀粉 1-15g；麸皮 5-20g；玉米浆 5-25g；(NH₄)₂SO₄ 0.5-2.5g；Na₂HPO₄ 0.2-2g； MgSO₄ 0.5-3g； CaCO₃ 0.1-1g，按比例配好培养基后煮沸10-30分钟，冷却到常温后备用。

5.根据权利要求4所述的凝结芽孢杆菌孢子的生产方法，其特征在于，所述步骤S4中，培养温度为25-50℃。

6.根据权利要求1所述的凝结芽孢杆菌孢子的生产方法，其特征在于，所述步骤S1中，同时开启紫外灯进行紫外诱变。

7.根据权利要求1所述的凝结芽孢杆菌孢子的生产方法，其特征在于，所述步骤S1中，诱变时间为50-70秒。

8.一种如权利要求1-7任一所述生产方法生产的凝结芽孢杆菌孢子。

9.一种如权利要求8所述凝结芽孢杆菌孢子的应用。

10.一种如权利要求8所述凝结芽孢杆菌孢子在养猪中的应用。