[发明专利]一种可同时检测古龙酸、古龙酸甲酯、甲醇和乙醇的高效液相方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学分析领域中的同时对多组分进行检测，尤其是涉及一种可同时检测古龙酸、古龙酸甲酯、甲醇和乙醇的高效液相方法。

背景技术

维生素C是药品和食品工业中的重要原料，目前，工业上主要采用莱氏法或二步发酵法生产维生素C。在采用两步发酵法生产维生素C的过程中，对中间体古龙酸超滤液或古龙酸甲酯固体等进行古龙酸、古龙酸甲酯、甲醇和乙醇的定性和定量对维生素C生产的过程控制和维生素C的成品质量至关重要。其中的古龙酸又叫2-酮基-L-古龙酸，古龙酸甲酯又叫做2-酮基-L-古龙酸甲酯。

传统上主要采用纸层析法和碘量法检测发酵液中的古龙酸，上述方法具有一定的局限性和繁琐性，个别微量物质无法检测出来，并且检测出的数据偏差较大。近年来，随着高效液相色谱（HPLC）的迅速发展，开始有学者专门研究针对古龙酸的高效液相方法。肖入峰等为了快速准确的检测维生素C生产工艺中维生素C的重要前体物古龙酸的浓度，采用高效液相色谱法进行测定，选用Carbohydrate分析柱，乙腈：磷酸二氢钾=60：40的流动相，在波长210nm处紫外光检测，控制流速为1ml/min和温度45℃，结果表明古龙酸在6min左右出峰，与VC具有较好分离度[文献来源：2-酮基-L-古龙酸的高效液相色谱测定方法和条件[J].环境科学与技术,2012,05:47-51.]。赵元芬等采用高效液相色谱法对古龙酸固体催化转化工艺过程的古龙酸甲酯、维生素C钠、古龙酸的含量进行了测定，其采用的条件为：色谱柱为Inertsil柱，流动相A相为乙腈，B相为0.20%TFA水溶液，梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温45℃[文献来源：高效液相色谱法测定古龙酸酯化转化工艺过程中多组分含量[J].中国药业,2010,22:36-37.]。

可以看出，目前的研究无法同时对维生素C生产中古龙酸、古龙酸甲酯、甲醇和乙醇进行定性和定量，因此，研制开发一种可同时检测古龙酸、古龙酸甲酯、甲醇和乙醇的高效液相方法一直是亟待解决的课题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可同时检测古龙酸、古龙酸甲酯、甲醇和乙醇的高效液相方法，该方法检测速度快、检测数据准确、重现性好、灵敏度高、操作方法简便、检测试剂和仪器应用广泛。

本发明的目的是这样实现的：一种可同时检测古龙酸、古龙酸甲酯、甲醇和乙醇的高效液相方法，所述方法包括如下步骤：

（1）色谱条件

色谱柱为聚苯乙烯二乙烯苯树脂柱，流动相为稀酸水溶液，流速为0.2-0.6ml/分钟，柱温25-85℃；检测器为示差折光检测器；

（2）标准品溶液的制备

精密称取适量标准品，使用流动相稀释成一定浓度后，过滤，得到标准品溶液；

（3）供试品溶液的制备

精密称取适量供试品，使用流动相稀释成一定浓度后，过滤，得到供试品溶液；

（4）测定

将标准品溶液与供试品溶液分别进行高效液相色谱检测，其中供试品溶液中待检测峰之间的分离度大于1.5，分别得到标准品溶液色谱图与供试品溶液色谱图，根据标准品与供试品的出峰时间来进行供试品组分的定性，通过外标法进行计算来得到待检测组分的含量；