[发明专利]L-杂环氨基酸的合成方法及具有其的药物组合物

权利要求书

1.一种L-杂环氨基酸的合成方法，其特征在于，包括：

步骤A，制备杂环酮酸，其中，所述杂环酮酸中的杂环选自五元单杂环五元单杂环、六元单杂环、七元单杂环、五元烷基取代单杂环、六元烷基取代单杂环和七元烷基取代

单杂环中的任一种，所述杂环酮酸中的酮酸基的结构式为且位于所述杂环的任一碳位上；

步骤B，将所述杂环酮酸与甲酸铵、苯丙氨酸脱氢酶、甲酸脱氢酶以及辅酶NAD⁺混合，进行还原氨基化反应，生成L-杂环氨基酸，其中，所述苯丙氨酸脱氢酶的氨基酸序列为SEQ ID No.1。

2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，编码所述苯丙氨酸脱氢酶的基因序列为SEQ ID No.2。

3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述苯丙氨酸脱氢酶的表达过程包括：

将包含所述基因序列的DNA片段插入载体，得到基因重组质粒；

将所述基因重组质粒转化入宿主菌，在培养基上进行培养，用诱导剂诱导所述苯丙氨酸脱氢酶的产生；

对所述宿主菌进行超声波破碎，然后离心分离得到粗酶混合液，所述粗酶混合液中包含所述苯丙氨酸脱氢酶以及所述甲酸脱氢酶。

4.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述粗酶混合液中，所述苯丙氨酸脱氢酶的酶比活为40～60U/ml，所述甲酸脱氢酶的酶比活为20～30U/ml。

5.根据权利要求3或4所述的合成方法，其特征在于，所述步骤B包括：

将所述杂环酮酸和所述甲酸铵加入水溶液中，调节pH值至8.2～8.5，加入所述粗酶混合液以及辅酶NAD⁺，于30～40℃下反应至原料转化完毕，得到所述L-杂环氨基酸。

6.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，

对应于每摩尔所述杂环酮酸，所述粗酶混合液的添加量为2～10ml；

对应于每摩尔所述杂环酮酸，所述辅酶NAD⁺的添加量为0.005～0.1摩尔，所述甲酸铵的添加量为1.5～5摩尔。

7.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述合成方法在所述步骤B之后还包括：

在反应后的体系中加入浓盐酸，过硅藻土，得到滤出液；

将所述滤出液pH值调节至5.0～7.0后过强酸性阳离子交换树脂，得到粗品；

将所述粗品浓缩，加醇类溶剂洗涤，烘干，得到纯化的所述L-杂环氨基酸。

8.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述杂环酮酸的制备方法包括以下步骤：

使杂环酮与乙酐、乙酸钠、N-乙酰基甘氨酸反应，得到中间产物，其中，所述杂环酮中的杂环选自五元单杂环、六元单杂环、七元单杂环、五元烷基取代单杂环、六元烷基取代单杂环和七元烷基取代单杂环中的任一种，所述杂环酮的酮基的结构式为且位于所述杂环酮的任一碳位上；

使所述中间产物在路易斯碱存在的条件下发生水解反应，酸化后得到所述杂环酮酸。

9.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述杂环酮酸的制备方法包括以下步骤：

将杂环烷基化合物与草酸二乙酯在正丁基锂或叔丁醇钾存在的条件下反应，生成杂环酮酸酯，其中，所述杂环烷基化合物中的杂环选自五元单杂环、六元单杂环、七元单杂环、五元烷基取代单杂环、六元烷基取代单杂环和七元烷基取代单杂环中的任一种，所述杂环烷基化合物的烷基为甲基且位于所述杂环烷基化合物的任一碳位上；

将所述杂环酮酸酯在路易斯碱存在的条件下发生水解反应，酸化得到所述杂环酮酸。

10.一种药物组合物，其特征在于，包括药物有效剂量的如权利要求1至9中任一项所述的合成方法合成得到的L-杂环氨基酸以及药用载体。