[发明专利]表达铁纳米颗粒以及温度敏感通道的病毒AAVHSTF及用途

权利要求书

1.一种表达铁纳米颗粒以及温度敏感通道的病毒AAVHSTF，其特征在于，其特征在于，它包括表达温度敏感通道的病毒AAVHSTF1和表达铁纳米颗粒的病毒AAVHSTF2，其中，所述病毒AAVHSTF1通过以下方法制备得到：首先进行目的片段构建设计：带有his-tag的TRPV1构建在CMV启动子下游，mCherry报告基因克隆于TRPV1下游，在TRPV1和mCherry之间有一个2A自身裂解片段，从而实现铁融合蛋白和EGFP的非融合共表达；然后进行病毒AAVHSTF1的包装：腺相关病毒经过表达、包装和包埋带有目的片段的质粒后，转染到HEK293T细胞系中，使其充分表达并形成病毒颗粒；48小时后将培养基收集，用多步离心法进行病毒颗粒的纯化和浓缩，最后将病毒溶解在灭菌的PBS中，分装并储存于-80℃备用，从而得到病毒AAVHSTF1；该病毒AAVHSTF1具有SEQ ID NO.1所示的基因序列；所述病毒AAVHSTF2通过以下方法制备得到：首先进行目的片段构建设计：小鼠铁蛋白重链与小鼠铁蛋白轻链之间用一个可变链接区进行克隆，形成铁蛋白轻链-连接体-重链融合蛋白，EGFP报告基因克隆位于铁蛋白融合蛋白基因下游，在铁融合蛋白和EGFP之间有一个2A自身裂解片段，从而实现铁融合蛋白和EGFP的非融合共表达；为了实现在某一类型的神经元的基因特异性表达，我们在CMV启动子下游TRPV1、铁融合蛋白之前插入了一段floxed stop 序列；然后进行病毒AAVHSTF2的包装：腺相关病毒经过表达、包装和包埋带有目的片段的质粒后，转染到HEK293T细胞系中，使其充分表达并形成病毒颗粒；48小时后将培养基收集，用多步离心法进行病毒颗粒的纯化和浓缩，最后将病毒溶解在灭菌的PBS中，分装并储存于-80℃备用，从而得到病毒AAVHSTF2；该病毒AAVHSTF2具有SEQ ID NO.2所示的基因序列。

2.一种上述表达铁纳米颗粒以及温度敏感通道的病毒AAVHSTF在激活神经元方面的用途。