[发明专利]睡莲花粉离体培养和活力测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种花粉离体培养的方法，特别涉及一种离体培养方法，还涉及睡莲花粉的活力测定方法，属于植物杂交育种技术领域。

背景技术

睡莲是睡莲科睡莲属( Nymphaea) 植物的泛称，以其丰富的花色、圣洁的寓意及茎叶对水中富营养物和有害物质的强吸附能力，深受人们的喜爱，被广泛应用于园林水景中。

    不同品种的睡莲花粉活力测定可以区分被测品种睡莲花粉的成活率，对指导睡莲育种具有重要理论和现实意义。有多种方法可以测定花粉的活力，其中花粉离体萌发可以直观地观察到死亡或缺乏生活力的花粉，测定的数据科学可靠，并完全定量。对于许多植物来说，花粉离体萌发都与结实和种子形成具有相关性，故花粉离体萌发测定仍为目前杂交育种中花粉生活力测定的首选方法。离体萌发法测定花粉活力需要特定的培养基和培养条件，培养基的主要成分一般包括Ca^2＋、硼和碳源等，有的植物还需要其他物质如植物激素6-BA或PEG等。目前，未见睡莲花粉离体萌发的培养基和培养条件的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种睡莲花粉离体培养方法，实现睡莲花粉离体萌发测定。

本发明通过以下技术方案予以实现：

一种睡莲花粉离体培养和活力测定方法，包括以下步骤:

1）配制液体培养基

按下列组分配制液体培养基：300 g/L的蔗糖、10 mg/L的硼酸、350 mg/L的硫酸镁、900 mg/L硝酸钾、800 mg/L氯化钙和100 g/L植物激素PEG1500，其余为睡莲花柱头盘上的蜜液；

2）睡莲花粉采集

七月下旬睡莲花开时节，早晨10:00采集盛开的睡莲花花粉，将睡莲花粉装入离心管中，避光备用；

3）睡莲花粉培养

将液体培养基滴在载玻片上，用毛笔将少量睡莲花粉蘸到液体培养基中，不覆盖载玻片，播种后将载玻片置于垫有湿润滤纸的培养皿内，在黑暗环境下培养；

4）睡莲花粉活力测定

    载玻片培养6 小时后，置于光学显微镜下观察发芽状况，能观察到已萌发睡莲花粉，所述已萌发睡莲花粉的花粉管长度大于花粉直径。

前述的睡莲花粉离体培养和活力测定方法，其中所述步骤3）的培养温度为24～26℃。

本发明相对于现有技术具有以下有益效果：

    睡莲花粉离体培养方法科学合理，首先，蔗糖、硼酸和钙对于花粉萌发和花粉管伸长是必需的，是花粉离体萌发培养基的主要成分。蔗糖在花粉萌发中主要起提供能源和调节渗透压作用，一定量的硼酸和钙离子能使花粉管长得较直且粗，不致过长。其次，植物激素PEG1500（聚乙二醇）能使花粉内膜结构发生变化，改变膜表面电荷，使膜的柔软程度和通透性提高，从而促进花粉萌发和花粉管生长。另外，睡莲柱头盘上的蜜液含有对花粉萌发有利的物质。本发明配制液体培养基有利于睡莲花粉萌发，具有播种花粉多且均匀的优点。本发明的睡莲花粉活力测定方法简单、可操作性强，数据可靠，并可完全实现定量检测，对于提高睡莲育种效率具有较高的实际应用价值。

    本发明的优点和特点，将通过下面优选实施例的非限制性说明进行解释，这些实施例是仅作为例子给出的。

具体实施方式

下面结合睡莲品种“彼得”的实施例对本发明作进一步说明。

本实施例包括以下步骤：

1）配制液体培养基

按下列组分配制液体培养基：300 g/L的蔗糖、10 mg/L的硼酸、350 mg/L的硫酸镁 、900 mg/L硝酸钾、800 mg/L氯化钙和100 g/L植物激素PEG1500 ，其余为睡莲花柱头盘上的蜜液。

    2）睡莲花粉采集

七月下旬“彼得”花开时节，早晨10:00左右采集盛开的睡莲花花粉，将睡莲花粉装入离心管中，避光备用。

 3）睡莲花粉培养

将液体培养基滴在载玻片上，用毛笔将少量睡莲花粉蘸到液体培养基中，不覆盖载玻片，播种后将载玻片置于垫有湿润滤纸的培养皿内，在25℃黑暗环境下培养。

 4）睡莲花粉活力测定

    载玻片培养6 小时后，置于光学显微镜下观察发芽状况，能观察到花粉管长度大于花粉直径的已萌发睡莲花粉。

    除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式，凡采用等同替换或等效变形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围内。