[发明专利]一种FAM84B反义核苷酸及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种FAM84B反义核苷酸及其在制备抑制结直肠癌细胞生长药物中的应用，具体涉及通过抑制FAM84B而抑制结直肠癌细胞的生长，属于生物医药领域。

背景技术

序列相似家族84成员B(family with sequence similarity84,member B，FAM84B)，FAM84B又名BCMP101，该基因在多种肿瘤中都高表达：乳腺癌、慢性粒细胞性白血病、食管癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤等。在结肠癌中发现该基因与myc共扩增的现象，该基因在乳腺癌中表达位于细胞相互接触的质膜处，且与α1-连环蛋白(α1-catenin)相互作用。连环蛋白是一组具有相似结构的胞内糖蛋白家族，是细胞骨架蛋白和细胞内信号转导分子，连环蛋白与上皮型钙粘蛋白形成的cadherin/catenin复合体在肿瘤的侵袭转移中起到重要的作用，该复合体是细胞间粘附分子的重要成员，不仅介导细胞间粘附，还直接或间接参与细胞的信号转导，在肿瘤的发生、发展和侵袭转移过程中具有重要作用。

双微体是基因扩增的一种主要形式，它们是细胞中环状成对、可自主复制的额外染色体成分，经常含有扩增的基因，参与细胞增殖，或为细胞生长提供选择优势。我们的前期工作发现并确认人结直肠腺癌细胞NCI-H716中有FAM84B基因的扩增和过表达，且该基因以双微体形式扩增，提示其过表达在结直肠癌的形成及演进过程中可能起到重要的作用。

在结直肠癌的手术治疗后，辅助化疗是结肠癌综合治疗的一个重要组成部分。辅助化疗的机理在于用化疗控制减灭根治术后体内的残留病灶。但因癌症化疗的副作用较大，往往会引起很多毒副反应和合并症、后遗症，从而为广大结直肠癌患者带来了较大伤害。

针对肿瘤细胞的特点进行特异性治疗可以提高肿瘤治疗的敏感性和特异性，有的放矢，我们针对与结直肠癌细胞发生发展过程中起重要作用的FAM84B用其反义核苷酸序列进行干扰，通过抑制FAM84B的表达从而控制结直肠癌细胞的生长，针对与结直肠癌细胞双微体形成密切相关的FAM84B进行干预，通过减少肿瘤细胞中双微体数目，从而可应用于结直肠癌细胞生长抑制药物的制备中。

发明内容

本发明针对目前结直肠癌化疗效果欠佳的情况，提供一种FAM84B反义核苷酸序列，核苷酸序列为SEQ ID No.1，这一序列干扰FAM84B表达，从而抑制结直肠癌细胞生长。

本发明通过抑制FAM84B，进而抑制结直肠癌细胞的增殖及侵袭能力，最终起到抑制结直肠癌细胞生长的作用。

本发明还包括含有上述核苷酸序列的表达载体以及宿主细胞，及其在制备抑制结直肠癌细胞生长的药物中的应用。

本发明取得的有益效果：

本发明针对FAM84B高扩增和高表达的结直肠癌细胞，利用FAM84B反义核苷酸序列，通过RNAi干扰的方法抑制FAM84B的表达，减少双微体数目，从而有效抑制结直肠癌细胞的生长，降低其恶性程度，将FAM84B的反义核苷酸序列应用于结直肠癌细胞生长抑制药物的制备中，能够为结直肠癌的生物治疗提供新的药物制备和靶向性治疗方案，提高治疗的特异性。

附图说明

图1为ShRNA-FAM84B重组质粒酶切鉴定图；

图2为使用NCBI数据库对测序所得到的沉默序列与基因FAM84B进行BLAST同源性分析比对图；

图3为NCI-H716转染后FAM84B表达情况的Realtime RT-PCR检测图；

图4为FAM84B基因沉默后NCI-H716细胞中期核型图；其中图A为对照-shRNA细胞中期核型图，图B为FAM84B-shRNA细胞中期核型图；

图5为FAM84B基因沉默后NCI-H716细胞中双微体数目散点图(平均值±标准差)；

图6为FAM84B基因沉默后NCI-H716细胞生长曲线图；

图7为FAM84B基因沉默后流式细胞术检测NCI-H716的细胞周期图；其中图A为对照-shRNA，图B为FAM84B-shRNA；

图8为FAM84B基因沉默后NCI-H716细胞的基底膜侵袭实验结果图；其中图A为对照-shRNA，图B为FAM84B-shRNA；

图9为FAM84B基因沉默后NCI-H716细胞侵袭细胞数比较的统计学分析图，其中,*为P<0.05，表示转染后细胞与未转染细胞相比，侵袭细胞数存在差异。

具体实施方式