[发明专利]一株分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Sao单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其制备方法无效
| 申请号： | 201310270480.9 | 申请日： | 2013-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN103333863A | 公开（公告）日： | 2013-10-02 |
| 发明（设计）人： | 潘秀珍;王晶;李敏;王长军;李先富;高基民 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军南京军区军事医学研究所 |
| 主分类号： | C12N5/20 | 分类号： | C12N5/20;C12N15/06;C12R1/91 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 夏平;傅婷婷 |
| 地址： | 210002 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 分泌 链球菌 表面 蛋白 sao 单克隆抗体 杂交瘤 细胞株 及其 制备 方法 | ||
1.1株分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Sao的单克隆抗体的杂交瘤细胞株2F1，其特征在于该杂交瘤细胞株通过如下方法制备：
（1）采用灭活的2型猪链球菌菌株05ZYH33四次免疫雌性BALB/c小鼠，使小鼠体内抗体达到最高峰时分离脾脏B淋巴细胞；
（2）将步骤（1）分离的脾脏B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合；
（3）以纯化后的重组Sao蛋白为抗原包被ELISA板，使用重组Sao蛋白ELISA筛选阳性克隆；再进一步以重组Sao蛋白为抗原用Western blot法再次验证ELISA筛选得到的阳性克隆，最终获得杂交瘤细胞株2F1。
2.根据权利要求1所述的分泌抗猪链球菌2型表面蛋白Sao单克隆抗体的杂交瘤细胞株2F1，其特征在于：（1）选用雌性BALB/c小鼠，采用甲醛灭活的05ZYH33分离株为免疫原，注射菌量为108cfu/只鼠，间隔1周追加免疫共3次，在融合前3天加强免疫一次，菌量为109cfu/只鼠。
3.一种制备分泌抗猪链球菌2型表面蛋白Sao单克隆抗体的杂交瘤细胞株的方法，其特征在于包含如下步骤：
（1）采用灭活的2型猪链球菌菌株05ZYH33四次免疫雌性BALB/c小鼠，使小鼠体内抗体达到最高峰时分离脾脏B淋巴细胞；
（2）将步骤（1）分离的脾脏B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合；
（3）以纯化后的重组Sao蛋白为抗原包被ELISA板，使用重组Sao蛋白ELISA筛选阳性克隆；再进一步以重组Sao蛋白为抗原用Western blot法再次验证ELISA筛选得到的阳性克隆，最终获得分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Sao的杂交瘤细胞株2F1。
4.根据权利要求3所述的制备分泌抗猪链球菌2型的单克隆抗体的杂交瘤细胞株的方法，其特征在于：（1）选用雌性BALB/c小鼠，采用甲醛灭活的05ZYH33分离株为免疫原，注射菌量为108cfu/只鼠，间隔1周追加免疫共3次，在融合前3天加强免疫一次，菌量为109cfu/只鼠。
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