[发明专利]一株盐沼鳞质霉菌及其发酵产酸方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物工程技术领域，具体涉及一种盐沼鳞质霉菌及其发酵产酸方法和应用。 

背景技术

土壤中具有解磷作用的微生物种类很多，包括细菌、放线菌和真菌。目前报道的解磷微生物中，细菌的种类最多，解磷真菌在数量和种类上远不及解磷细菌，主要是青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergilhu)和根霉属(Rhizopus)。然而前人报道解磷真菌的解能力一般要比细菌强，且细菌在进一步分离纯化时解磷能力减弱，真菌仍然能保持较高的解磷活力。现在，解磷微生物对难溶无机磷酸盐的解磷机制一般认为是菌体在生命活动中分泌出各种有机酸，将难溶性磷溶解出来，也称为“酸解作用”。据研究，青霉、曲霉、肠杆菌和欧文氏杆菌等之所以能溶解无机磷酸盐，主要是由于分泌有机酸溶解磷矿粉。有的微生物不产生有机酸也具有解磷能力，它们可能与呼吸作用放出CO₂ 溶于水形成的碳酸和NH⁴⁺/H⁺交换机制相关。而当土壤有效磷低于一定值时，微生物和植物受到低磷胁迫，通常在碱性环境中便会分泌胞外磷酸酶、核酸酶、脱氢酶和植酸酶等物质，将卵磷脂、核蛋白、植素等有机磷酶解，释放无机磷供给植物利用。本发明旨在从我国苏北滩涂土壤中分离获得到一种安全可靠的耐盐真菌类解磷菌，利用其很好的解磷效果，用于盐土改良和盐生植物的培养种植。 

发明内容

本发明需要解决的技术问题是针对盐土缺磷（特别是有效磷）的现状，从我国苏北互花米草滩涂土壤中分离得到一种解磷真菌，盐沼鳞质霉菌及其发酵产酸方法和应用。 

本发明的技术方案： 

本发明所述菌株是来自盐城国家级珍禽自然保护区互花米草滩涂土壤，命名为盐沼鳞质霉菌（Apophysomyces spartina），2013年6月19日保藏于中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院北京微生物研究所，保藏号为CGMCCNo.7717。 

本发明还公开了上述盐沼鳞质霉发酵产酸的方法：以5%接种量接种到改良马丁液体培养基中，培养基中NaCl含量为1.26%，装液量150mL/250mL，pH 6.0-7.0，28℃摇床培养，转速160rpm，2－4天后，发酵液pH值急速下降，此时菌液含菌量为6.7 × 10⁸个菌落ml^-1，至第7天，pH值平均下降至2.27。 

与现有技术相比，本发明有益效果 

（1）盐沼鳞质霉具有很好的解磷效果，不仅对盐土改良有益，而且对植物和土壤动物（蚯蚓）是安全的，有利于植物的生长。可应用于盐土改良和盐生植物的培养和种植。 

（2）利用改良马丁培养基（NaCl含量为1.26%）做基质发酵，7天即可达产酸高峰，发酵液可用于盐土改良。 

（3）通过简单接种发酵培养，3天为一培养周期可大规模生产解磷菌(此时菌液含菌量为6.7 × 10⁸个菌落ml^-1)，节省大量动力和人工费用； 

（4）盐沼鳞质霉具有耐盐、高效解磷、对植物和土壤动物（蚯蚓）无害、安全性高的特点。

附图说明

图1 马丁固体培养基培养3天后盐沼鳞质霉菌SM-1菌落形态 

图2 马丁液体培养基中的盐沼鳞质霉菌SM-1菌球

图3盐沼鳞质霉菌SM-1的不规则网状菌丝（A）和膨大结构（B）

图4盐沼鳞质霉菌SM-1的孢子（A和B为囊状分生孢子；C和D为畸变菌丝分生孢子）

图5 盐沼鳞质霉菌SM-1基因组18S rDNA ,28S rDNA(D1/D2区), ITS区PCR扩增电泳图谱

图6使用引物1构建的系统发育进化树

系统进化树运用MEGA4.0软件中的邻接近法（Neighbor-Joining）对测序结果与GenBank数据库的相似序列进行同源性分析。删除缺口和缺失的数据后共有1369bp的长度，进化距离运用最大似然方法（maximum Composite Likelihood）方法，显示出最优树分枝长度之和为0.80662650）

图7 使用引物2构建的系统发育进化树