[发明专利]抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体及其应用。

背景技术

弓形虫病是一种呈世界性分布且严重危害人类健康和畜牧业发展的人兽共患寄生虫病。人类可通过食用未煮熟的含有弓形虫包囊的猪肉感染弓形虫病。弓形虫病能够引起孕妇流产、早产、畸胎、死胎等。

弓形虫的检测方法有多种。病原学检查，如从体液和组织中镜检虫体、动物接种等，找到虫体可以确诊，但是检出率低，耗时长；血清学检查有染色试验（DT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接血凝试验（IHA）、免疫印迹等方法，敏感性高，但是特异性有待提高；基因检查，如DNA探针技术、聚合酶链反应等方法，具有较高的敏感性和特异性，但操作复杂、实验条件要求较高； IgM和IgG检测试剂盒价格昂贵，难以推广应用与流行病学普查。

弓形虫微线体蛋白3（MIC3）存在于弓形虫速殖子期、缓殖子期和子孢子期等不同时期的排泄物中, 持续时间长。

发明内容

本发明的目的是提供一种分泌抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株D3。MIC3蛋白的全称是微线体蛋白3。

本发明的另一目的是提供所述杂交瘤细胞株D3分泌的抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体，该单克隆抗体效价高、特异性好。

本发明提供的抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体的制备方法简单，抗体纯化过程简单，效率高。

一种分泌抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株D3，其保藏号为CCTCC NO：C201383。

一种所述杂交瘤细胞株D3分泌的抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体。

所述抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体在制备检测弓形虫的试剂盒中的应用。

所述抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体在制备检测弓形虫的胶体金试纸条中的应用。

含有权利要求2所述抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体的检测弓形虫的试剂盒。

含有权利要求2所述抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体的胶体金试纸条。

有益效果：

本发明杂交瘤细胞株D3能够稳定、高效的分泌抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体。该单克隆抗体对弓形虫MIC3蛋白的效价高，特异性好，因此，可以用于制备检测弓形虫的试剂盒和胶体金试纸条。本发明提供的抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体的制备方法简单，抗体纯化过程简单，效率高，成本低。采用本发明提供的抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体来检测弓形虫，快速、敏感、特异性高、操作简单而且成本低。

附图说明

图1 是重组MIC3蛋白的SDS-PAGE电泳图，其中1：含空载体BL21菌体的蛋白；  2：插入含有MIC3基因重组质粒的BL21未诱导的裂解液上清； 3：插入含有MIC3基因重组质粒的BL21诱导表达后的裂解液上清；  4：纯化后的重组MIC3蛋白； M-分子量Mark。

图2 是抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体的Western blot 分析，其中1：纯化的重组MIC3蛋白；2：含有空载体BL21菌体的蛋白；3：全虫蛋白； M：蛋白质Marker。

图3本发明金标试纸敏感性试验结果， 1-6的检测样品为不同浓度的弓形虫悬液，其中1-4×10⁶个虫/mL， 2-4×10⁵个虫/mL， 3-4×10⁴个虫/mL， 4-4×10³个虫/mL， 5-4×10²个虫/mL，6-PBS。

图4 本发明金标试纸特异性检测结果，其中1-弓形虫，2- PBS阴性对照，3-大肠杆菌E. coli O26，4-猪霍乱沙门氏菌，5-猪囊尾蚴，6-华支睾吸虫，7-猪蛔虫。

杂交瘤细胞株D3保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC）（地址：中国武汉大学），其保藏号为CCTCC No：C201383，保藏日期为：2013年5月22日，分类命名为杂交瘤细胞株D3。

具体实施方式

本发明实施例中使用的实验方法若无特殊说明，均为常规方法。

弓形虫NT株由本实验室保种。