[发明专利]大豆转基因检测试剂盒

权利要求书

1.一种大豆转基因检测试剂盒由引物组合和膜芯片组成，其特征在于引物组合为7重聚合酶链式反应（PCR）引物组合，各对引物的碱基序列5’-3’如下：

Pat：正向引物： TGATATGGCCGCGGTTTGTGAT

反向引物： GGCCCAGCGTAAGCAATACC

Bar：正向引物： GGGGATCTACCATGAGCCCA

反向引物：GGCTCGGTACGGAAGTTGAC

Cry1Ab：正向引物：CGACATCTCCTTGTCCTTGAC

反向引物：CTCAATTTGCACCAGGAATGC

Cry105：正向引物： ACTCGATCAGGTACAATGCCA

反向引物：GCATCTGTTAGGCTCTCCAC

EPSPS：正向引物： GCGCGATCATACGGAAAAGAT

反向引物：TCGATGACTTGGCCGGTGAG

P35S：正向引物：AAGACGTTCCAACCACGTCTTCAA

反向引物：GAGGAAGGGTCTTGCGAAGG

Lectin：正向引物：CAGCAATATCCTCTCCGATGTG

反向引物： AGGATCAATGTTACTGCTAGCGTG；

膜芯片为顺序固定在支持膜表面的7组探针序列和一组阳性对照（Positive）探针序列，7组探针序列和阳性对照探针序列的碱基序列5’-3’如下：

Pat探针: GCAAGATAGATACCCTTGGTTGGTTGCTGAGGTTGAGGGTGTT

GTGGCTGGTATTGCTT

Bar探针: ACCGAGGCGGACATGCCGGCGGTCTGCACCATCGTCAACCAC

TACATCGAGACAAGCAC

Cry1Ab探针: GCTGGGTTCGTTCTCGGACTAGTTGACATCATCTGGGGTATCT

TTGGTCCATCTCAATG

Cry105探针: GACCGTGAATGTCCCAGGTACTGGTTCCCTCTGGCCACTTTC

TGCCCAATCTCCCATTG

EPSPS探针: ACCTTACCGTCGAGACGGATGCGGACGGCGTGCGCACCATCC

GCCTGGAAGGCCGCGGC

P35S探针: CAAAGCAAGTGGATTGATGTGATATCTCCACTGACGTAAGGGAT

GACGCACAATCCCAC

Lectin探针:  CTCGACATACCTGGGGAATCGCATGACGTGCTTTCTTGGTC

TTTTGCTTCCAATTTGCC

Positive探针：GCATCCAGATCAGAAGCAATAATGAGCAGTGCGAGAAGAAC

GAGTGTCCAAAGTACCAG。

2.根据权利要求1所述的大豆转基因检测试剂盒，其特征在于所述引物组合中有非对称PCR扩增引物，为5’端带生物素标志（biotin）的Tag引物，其碱基顺序如下所示：

Tag引物：biotin-5’-AGACGCCACCGCCAGCGTATTATCCGAGC C-3’。

3.根据权利要求1或2所述的大豆转基因检测试剂盒，其特征在于所述大豆转基因检测试剂盒由引物组合、膜芯片和辅料组成，辅料为脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）、EX-Taq聚合酶（Polymerase）和5’端带生物素标志的阳性寡核苷酸单链DNA，5’端带生物素标志的阳性寡核苷酸单链DNA的碱基顺序为biotin-5'-CTGGTACTTTGGAC

ACTCGTTCTTCTCGCACTGCTCATTATTGCTTCTGATCTGGATGC-3’。

4.根据权利要求3所述的大豆转基因检测试剂盒，其特征在于所述大豆转基因检测试剂盒由引物组合、膜芯片、辅料和配液组成，配液为10×PCR缓冲液、预杂交液、杂交液、洗液、封闭液、链酶亲和素标记辣根过氧化物酶和四甲基联苯胺（TMB）显色液。