[发明专利]检测肿瘤侵袭性的PNC检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.检测肿瘤侵袭性的PNC检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的检测一抗为PTB或CUG-BP1的抗体。

2.检测肿瘤侵袭性的PNC免疫组化检测试剂盒，包括抗原修复浓缩液、过氧化物酶阻断液、封闭血清、检测一抗、生物素标记二抗、链霉素抗生物素－过氧化物酶溶液、DAB显色液、甲基绿染色液，其特征在于：所述检测一抗为PTB或CUG-BP1的抗体。

3.如权利要求2所述PNC免疫组化检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：

1）组织石蜡切片脱腊水化后，用PBS洗三次；

2）采用微波法进行组织抗原修复，再依次滴加过氧化物酶阻断溶液和封闭血清；

3）除去血清后，滴加适当稀释的PTB或CUG-BP1检测一抗，并孵育；

4）弃一抗后，PBS 洗三次，滴加生物素标记的二抗，孵育后再以PBS 洗三次；

5）滴加链霉素抗生物素－过氧化物酶溶液，孵育后用PBS洗三次，再用新鲜配制的DAB溶液进行显色；

6）超纯水冲洗，甲基绿复染后再水洗，最后经干燥透明后封片。

4.如权利要求2所述PNC免疫组化检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒用于组织石蜡切片，组织芯片的检测。

5.检测肿瘤侵袭性的PNC免疫荧光检测试剂盒，包括检测一抗、Alexa Fluor 488标记二抗、DAPI、防荧光淬灭封片剂，其特征在于：所述检测一抗为PTB或CUG-BP1的抗体。

6.如权利要求5所述PNC免疫荧光检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：

1）细胞爬片用4%多聚甲醛固定后，用PBS洗三次；

2）经0.5% Triton X-100破膜后，滴加适当稀释的PTB或CUG-BP1检测一抗，并孵育；

3）弃一抗后，PBS 洗三次，滴加Alexa Fluor 488标记的二抗，孵育后再以PBS 洗三次；

4）DAPI复染细胞核并水洗后，滴加防荧光淬灭封片剂进行封片。

7.如权利要求5所述的检测肿瘤侵袭性的PNC免疫荧光检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒用于组织冰冻切片，细胞爬片的检测。

8.一种筛选新型抗转移化合物的方法，包括如下步骤：（1）采用权利要求5所述的PNC免疫荧光检测试剂盒检测化合物作用后肿瘤细胞中的PNC比例，并统计分析PNC抑制率；（2）根据PNC抑制率与新型化合物的抗转移潜力呈正相关来筛选化合物。

9.根据权利要求8所述的筛选新型抗转移化合物的方法，其特征在于：所述筛选方法步骤（1）的具体步骤如下：

1）肿瘤细胞爬片过夜后，分别加入梯度浓度的化合物作用12～24小时，以添加化合物助溶剂DMSO的作为对照；

2）细胞爬片用4%多聚甲醛固定后，按PNC免疫荧光试剂盒的操作步骤进行检测；

3） PNC免疫荧光染色并封片后的片子，于激光共聚焦显微镜或普通荧光显微镜下观察并计数含PNC的细胞占总细胞的比例，每次计数100个细胞，计数3次后取平均值；

4） 计算PNC抑制率：PNC抑制率=(助溶剂DMSO组的PNC比例-化合物组的PNC比例）／助溶剂DMSO组的PNC比例×100%，再行统计分析。

10.如权利要求8或9所述的筛选新型抗转移化合物的方法，其特征在于：可用于小分子化合物和中药单体的筛选。