[发明专利]黑果枸杞果实提取物及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种黑果枸杞果实提取物及其应用，具体涉及黑果枸杞果实提取物在制备治疗因细胞毒性药物（如环磷酰胺）和有毒化学品（如苯）诱导的白细胞降低药物中的应用。 

背景技术

很多情况可导致人体的白细胞降低，病因可以是继发性，某些感染例如细菌、病毒等，化学或物理因素例如一定剂量的药物（抗肿瘤药物）、有毒化学品(苯)、电离辐射等以及血液病、脾功能亢进，结缔组织疾病等，原发性疾病例如某些少见的原发性疾病、遗传性疾病以及细胞毒性药物，包括环磷酰胺、白消安、氟尿嘧啶等。此外，许多药物都可以偶致某些病人患白细胞减少症，白细胞减少症的最主要合并症是造成感染，感染严重者可以致死。而一般的白细胞减少症患者常致疲乏、无力、易感染等。 

目前，为了减轻人体的白细胞降低，目前国内外临床均广泛使用粒-单细胞刺激因子（GM-CSF）和粒细胞刺激因子（G-CSF），已证明有肯定疗效。但是，由于此二药物半衰期短，只有2～3h，最好每12h皮下注射1次（口服无效），而且是蛋白多肽药物，稳定性差，储存条件严格，给病人治疗带来很大的不便。 

黑果枸杞（LyciumruthenicumMurr.）系茄科枸杞属多年生耐盐抗旱灌木植物，主要生长于我国西北高原地区的盐碱荒漠地带，藏药称其果实为“旁玛”，据《四部医典》和《晶珠本草》等藏医药经典著作记载，可用于治疗心热病、心脏病、月经不调和停经等病症。天然花青素类化合物由于可清除人体内代谢过程中产生的过多自由基，具有较强的防止活性氧危害及抗氧化活性，对于疾病的防治起着重要作用。 

目前，针对黑果枸杞果实中花青素的提取，赵晓辉等公布了一种采用膜分离技术制备黑果枸杞原花青素产品的方法（黑果枸杞原花青素产品及其制备方法，申请号：201010525734.3），该方法包括以下步骤：黑果枸杞鲜果榨汁→陶瓷膜过滤→滤液过非极性大孔树脂柱→水洗→乙醇洗脱得含原花青素的洗脱液→有机膜处理洗脱液得原花青素精提液→喷雾干燥得产品。该方法主要是通过不同粒度的有机膜来处理样品，得到的原花青素样品中必然含有大量与黑果枸杞中花青素类化合物分子量接近的其他成分，同时，果渣中的花青素成分被浪费了，资源没有得到充分利用；最后的干燥工艺用的是喷 雾干燥，由于其温度较高，花青素成分易被氧化破坏；并且申请者没有公布这些原花青素产品主要包括哪些花青素化合物，也没有公布其含量测定的方法，很难保证产品的质量。另外，丁晨旭等也公布了一种从黑果枸杞果实中提取花色苷的方法（申请号：201010571739.X），该方法通过以下步骤完成：黑果枸杞果实用pH=1～4的乙醇溶液浸提，过滤，得浸提液→减压浓缩至固形物浓度大于40%的浓缩液→聚苯乙烯大孔树脂吸附浓缩液，用乙醇水溶液洗脱，当颜色变深时开始收集，得纯化的黑果枸杞果实花色苷提取液→减压浓缩得固形物大于60%的浓缩液，然后冷冻干燥的黑果枸杞果实花色苷产品。该方法提取时用的是酸性乙醇溶液，在上树脂前需要浓缩除去乙醇，需要耗能，同时，会将很多非花色苷的醇溶性成分带入产品中；另外，提取浓缩液用大孔树脂吸附后，直接用乙醇水溶液洗脱，会使得其大量的糖类成分没有被除去而带入产品中，影响产品花色苷的纯度，且会有较多花青素成分洗脱不下来，造成不必要的浪费。最为主要的是这两个提取方法得到的产品成分不清楚，也没有质量控制方法，产品质量难以保证。发明内容 

本发明的目的是公开一种黑果枸杞果实提取物及制备方法和应用，以满足临床应用的需要。 

所述的黑果枸杞果实提取物，是采用包括如下步骤的方法制备的： 

（1）提取：将黑果枸杞果实，加入重量浓度为1～2‰酸的水溶液，温度10～60℃搅拌提取，提取时间为1～3小时，优选提取1～3次，每次0.5～1小时，过滤收集提取液； 

酸的水溶液的重量用量为黑果枸杞果实的8～12倍； 

所述的酸选自盐酸、醋酸、甲酸、柠檬酸、草酸或磷酸； 

（2）吸附：将步骤（1）中得到的提取液，通过装有聚苯乙烯—二乙烯苯大孔树脂的层析柱，使黑果枸杞果实提取液得到选择性充分吸附； 

（3）洗脱：先用水洗脱步骤（2）中吸附了黑果枸杞果实提取液的层析柱，直至洗脱液为中性或检测无糖反应，再用洗脱液洗脱，收集层析柱流出的洗脱液； 

所述洗脱液由如下重量百分比的组分组成： 

酸                          0.1～2‰ 

体积浓度为75%的乙醇水溶液    余量 

洗脱液的重量用量为步骤（1）中黑果枸杞果实重量的15～20倍；