[发明专利]狂犬病、破伤风双效马抗血清及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体涉及一种狂犬病、破伤风双效马抗血清及其制备方法。

背景技术

狂犬病是一种自然疫源性疾病，是由狂犬病毒引起的所有温血动物都易感的人兽共患性疾病，一旦发病死亡率为100%，及时进行狂犬病抗血清或者免疫球蛋白的注射，以及狂犬病疫苗的及时接种，是唯一的保护性措施。我国的狂犬病防治形势非常严峻。

当人受外伤时，破伤风杆菌会经伤口侵入人体，释放出一种高度毒性蛋白——破伤风痉挛毒素，引起神经症状肢体痉挛性麻痹（局部性破伤风）和全身抽搐（全身性破伤风）。

人被狗咬伤后，需要同时预防狂犬病和破伤风。现有的方法一般是分别注射破伤风免疫球蛋白和狂犬病免疫球蛋白，由于注射量较大，注射针次较多，而且费用很高，患者难以接受。另外一种是注射马抗血清，马抗血清是将抗原免疫马匹后，马匹产生抗病原微生物的高效抗体，将含有高效抗体的血清进行分离、纯化制备而成，目前市场上有单价的抗狂犬病抗血清，以及抗破伤风抗血清，但由于其都为马的抗体蛋白提取终究为异源蛋白，大剂量的注射不可避免地产生过敏反应，目前没有抗破伤风与抗狂犬病的双效血清上市，只有申请号为200910088039.2的中国发明专利公开了一种狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白，由于是正常人群免疫后获得，所以来源有限，价格高昂，大规模的获取存在很大的困难。

发明内容

本发明的目的是弥补现有技术及产品效能的不足，提供一种人用的既能预防狂犬病同时又能预防破伤风的狂犬病、破伤风双效马抗血清及其制备方法。

技术方案如下：

一种狂犬病、破伤风双效马抗血清，它是用狂犬病毒灭活抗原和破伤风类毒素抗原对健康马匹进行注射免疫并使之产生抗体血清，采血并选取每1ml含抗狂犬病血清效价100~20000国际单位，含抗破伤风血清效价1100~20000国际单位的血浆，用注射用水稀释2~4倍后进行纯化精制并加入氯化钠、硫柳汞制备而成的，所述狂犬病、破伤风双效马抗血清中每1ml含抗狂犬病血清效价不少于200国际单位，含抗破伤风血清效价不低于2000国际单位，F(ab’)₂的纯度为60~95%，IgG的含量为1~10%，蛋白质的含量为10~150g/L，氯化钠的含量为7.5~9.5g/L，硫酸铵的含量为0.2~1.0g/L，防腐剂硫柳汞的含量为0.07~0.10g/L。

一种狂犬病、破伤风双效马抗血清的制备方法，包括以下步骤：

1）挑选健康马匹，在0、14天注射狂犬病毒灭活抗原，然后于21天进行破伤风类毒素抗原的初次免疫注射和狂犬病毒灭活抗原的第三针注射，最后于45和60天同时进行狂犬病毒灭活抗原与破伤风类毒素抗原的加强免疫注射，每次注射的狂犬病毒灭活抗原和破伤风类毒素抗原均为5ml，

所述狂犬病毒灭活抗原的效价为15~50IU/ml，其佐剂是液体石蜡与羊毛脂配成的油包水型不完全福氏佐剂，

所述破伤风类毒素抗原的效价为100~500Lf/ml，其佐剂是液体石蜡与羊毛脂配成的油包水型不完全福氏佐剂；

2）免疫完成后的第15天采集血浆，选取每1ml含抗狂犬病血清效价100~20000国际单位，含抗破伤风血清效价1100~20000国际单位的血浆，用注射用水稀释2~4倍；

3）稀释后的血浆经纯化精制，即得。

其中，稀释后的血浆是采用以下方法纯化精制的：

1）将稀释后的血浆调整PH值至3.1~3.7，然后加入胃蛋白酶至胃蛋白酶的终含量为3~12u/g，消化60~120分钟后加入硫酸铵盐析、过滤，取沉淀；

2）将沉淀用注射用水完全溶解，按重量加入0.8~1.2%的明矾，调整PH值至7.7~7.9，吸附1小时后过滤，除去明矾，上清液超滤浓缩，向浓缩液中加入注射用水调整蛋白质含量为10~150g/L，并加入氯化钠、硫柳汞使氯化钠的浓度为7.5~9.5g/L、硫柳汞的浓度为0.07~0.1g/L，调pH值至6.0~7.0；

3）将步骤2）得到的溶液用0.20微米滤膜除菌过滤，除菌过滤的压力为0.01~0.15MPa。