[发明专利]一种山荆子叶醇提物的制备方法及其抗氧化和肝保护作用

说明书

技术领域

本发明涉及一种山荆子叶醇提物的制备及其在急性肝损伤中起到的保护作用和抗氧化作用。属于药物技术领域。 

背景技术

山荆子[Malus baccata(Linn.)Borkh.]，别名山丁子、林荆子、山定子等，是蔷薇科(Rosaceae)苹果属(Malus)多年生木本植物，主要分布于我国东北、华北及西南等地，朝鲜及俄罗斯西伯利亚也有分布[1]。现在的研究主要集中在其绿化观赏及抗旱等作用方面[2-3]，对于其化学成分的研究少有报道。山荆子花和叶的挥发油成分主要为萜类、酯类和烯烃类化合物，主要成分是法呢烯[4]。而多酚和黄酮类化合物是山荆子的主要活性物质，其中根皮苷是其药理活性成分之一[5，6]，它是一种广泛分布于苹果、苹果树皮和叶以及多穗柯甜茶嫩叶中的多酚类化合物，具有抗氧化[7]、调节血糖[8]、清除自由基[9，10]等多种药理活性。我国的很多地区用山荆子叶煮茶以用来减肥，山荆子叶醇提物能够抑制脂肪酸合酶的能力，具有一定的减肥效果[11]。目前，对于山荆子叶中根皮苷的含量测定仅少数文献报道[12]，山荆子叶中黄酮含量尚未见报道。本发明采用HPLC法测定山荆子叶中根皮苷以及黄酮的含量，并测定了山荆子叶醇提物的抗氧化活性。山荆子叶提取物的保肝活性尚未见报道。本发明通过CCl4致小鼠急性肝损伤模型测定山荆子叶醇提物的保肝活性。 

CCl4诱导肝损伤模型已广泛用于植物提取物的抗氧化活性测定[13，14.15].CCl4在细胞膜上发生变化，这会让细胞内的酶失去平衡[16]。有毒代谢产物CCl3通过P4502E1酶进一步转化为三氯甲基过氧自由基，这种共价化合物能够引起细胞膜过氧化的降解，引起膜通透性升高，致使胞浆内ALT大量释放入血中，从而损伤肝细胞膜结构和功能的完整性[17]。本发明通过在体外FTC及TBA法测定抗氧化实验表明，山荆子醇提取物可以抑制亚油酸形成的过氧化反应，可以很好地清除DPPH和ABTS自由基。体内小鼠诱导肝损伤实验中，模型组小鼠MDA含量、ALT、AST活性显著升高，而不同浓度的山荆子醇提取物能够降低MDA含量和ALT、AST活性，对四氯化碳所致肝损伤有一定保护作 用。 

SOD是一种抗氧化酶，它在预防由自由基引起的肝损伤中起到重要的作用。GSH，是一种非酶性抗氧化剂，能够把过氧化氢分解氧气和水，形成了抵抗自由基的第一道防线[18]。本发明中由四氯化碳诱导的小鼠肝损伤组可以看出，GSH含量、SOD活性明显降低，而不同剂量给药组中，均能够提高肝脏中GSH含量和SOD活性。这表明山荆子醇提取物可以提高肝细胞内氧化酶和非氧化酶的含量，通过这种途径对肝脏起保护作用。 

发明内容

本发明提供了一种山荆子叶醇提取物的提取制备方法，适用于工业化生产。 

本发明提供的一种山荆子叶醇提取物，其中以根皮苷、黄酮为主要活性物质。 

本发明提供的一种山荆子叶醇提取物，该山荆子醇提取物对具有抗氧化、清除自由基的作用。 

本发明提供的一种山荆子叶醇提取物，该山荆子醇提取物对急性肝损伤具有显著的改善和保护作用。 

本发明进一步公开了山荆子叶醇提取物在预防、治疗和辅助治疗肝病中的应用，尤其是酒精刺激等由于过氧化引起的急性肝损伤，具有显著的效果。 

本发明提供的山荆子叶醇提取物的制备方法，具体技术方案如下： 

称取阴干后的山荆子叶，粉碎，按料液质量比1∶25-1∶30加入30-99％的乙醇，在40℃，40Hz、250W的条件下超声提取30-90min，提取1-5次，过滤合并提取液，减压浓缩至浸膏状，冷冻干燥得山荆子叶醇提取物。 

本发明山荆子叶醇提取物的保肝作用，其特征在于是以根皮苷和黄酮为主要有效成分制成的。本发明中，我们测定了山荆子乙醇提取物体外抗氧化活性及体内对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤的保护作用。结果表明，山荆子乙醇提取物在体外具有较强的抗氧化活性。在体内，当给药剂量达到300mg/kg的时候，其对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤具有较好的保护作用。山荆子乙醇提取物的这种活性可能归结于其内的黄酮和多酚类化合物，其保护机制可能与清除自由基，减轻脂质过氧化，保护细胞结构和功能的完整性，减低肝细胞内MDA水平，提高SOD活性和GSH含量；降低肝细胞内ALT、AST含量有关 

本发明提供了该山荆子叶醇提取物的制备方法，其特征在于： 

(1)称取阴干后的山荆子叶，去除杂质粉碎。 

(2)加入25-30倍量的30％-99％的乙醇，以超声提取30-90min，提取1-5次，离心过滤，去除残渣，得滤液。