[发明专利]长江江豚芳香黄杆菌基因诊断试剂盒无效
申请号: | 201310276004.8 | 申请日: | 2013-07-03 |
公开(公告)号: | CN103409510A | 公开(公告)日: | 2013-11-27 |
发明(设计)人: | 于道平;张叔勇 | 申请(专利权)人: | 安庆师范学院;中国科学院武汉病毒研究所 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 246133 *** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 长江 江豚 芳香 杆菌 基因 诊断 试剂盒 | ||
技术领域
本发明涉及一种细菌基因诊断试剂盒,尤其涉及一种长江江豚芳香黄杆菌基因诊断试剂盒。
背景技术
长江江豚(Neophocaena asiaeorientalis asiaeorientalis)是狭脊江豚(N. asiaeorientalis)唯一的淡水亚种,仅生活在中国长江中下游干流及其主要通江湖泊,2011年被IUCN红色名录列为易危级(A2dce),2012长江淡水豚考察报告宣布长江江豚种群数量约为1000头,呈加速下降趋势。
鲸豚类患细菌性肺炎相当普遍,Gonzales-Viera等人(2010年)在对29例死于肺炎的病例进行病因调查时发现,至少有21%的肺炎与细菌感染有关,14%的肺炎与寄生虫和细菌混合感染有关。细菌性肺炎是导致鲸豚类死亡的主要原因之一,特别是人工饲养。近年来从鲸类肺炎分离出许多细菌得到确认,其中主要的病原菌有葡萄球菌、链球菌、假单胞菌和克雷伯氏菌(Dunn et al 2001)。目前没有关于江豚芳香黄杆菌的报道。
芳香黄杆菌(Flavobacterium odoratum)属于黄杆菌属,为革兰氏阴性菌,在人类肺炎病人中偶有发现(宋长广,《中华医院感染学杂志》2005年第15卷第10期)。
在研究长江江豚病害的过程中,从安徽省某地分离到一株长江江豚芳香黄杆菌(NaFod, Neophocaena asiaeorientalis Flavobacterium odoratum),并克隆测序得到部分基因组序列。序列分析表明长江江豚芳香黄杆菌与其它黄杆菌成员在蛋白质水平最高具有98%同源性,属于新的黄杆菌毒株。由于芳香黄杆菌对多数抗生素具有抗性,因此,建立灵敏准确的检测技术对于治疗江豚肺炎,保护江豚种群数量具有重要意义。目前没有关于江豚芳香黄杆菌检测技术的专利和报道。
发明内容
本发明的目的是填补现有技术的空白,提供一种快速、灵敏、准确地检测出长江江豚否携带芳香黄杆菌的基因诊断试剂盒。
为实现上述目的,本发明的长江江豚芳香黄杆菌基因诊断试剂盒,由以下试剂组成:
试剂A:组织匀浆缓冲液,为Tris-NaCl-EDTA缓冲液;
试剂B:DNA提取液,为DNAzol液;
试剂C:PCR反应液,其中含有特定引物NaFod-320R及 NaFod-320F,其序列为:
NaFod-320R 5′- TCGCTGCCTTTGACCTA -3′;
NaFod-320F 5′-TTATCGATCTCCTGTTGACTT -3′;
试剂C中分别所含的特定引物NaFod-320R和NaFod-320F,应有足够的含量,一般应不少于8 pM;
试剂D液,阳性对照,为NaFod阳性DNA模板。
所说的试剂C:PCR反应液,每管组成为:
2 mM MgCl2,
5 μl 10×PCR缓冲液,
41 μ1 ddH2O,
2U Taq酶,
10 pM NaFod-320R及NaFod-320F。
本发明根据长江江豚芳香黄杆菌的基因组序列设计一对特异性引物,采用PCR的方法,可以对长江江豚是否感染芳香黄杆菌进行检测。具有下列优点和积极效果:
1、本发明能快速、灵敏、准确地检测出长江江豚否携带芳香黄杆菌。
2、本发明适用于检测江豚芳香黄杆菌。
附图说明
图1是PCR产物电泳结果图。
具体实施方式
本发明的长江江豚芳香黄杆菌基因诊断试剂盒,由以下试剂组成:
试剂A:组织匀浆缓冲液,为Tris-NaCl-EDTA缓冲液;
试剂B:DNA提取液,为DNAzol液;
试剂C:PCR反应液,其中含有特定引物NaFod-320R及 NaFod-320F,其序列为:
NaFod-320R 5′- TCGCTGCCTTTGACCTA -3′;
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