[发明专利]一种猪瘟冻干疫苗

说明书

技术领域

本发明属于兽用疫苗技术领域，具体涉及一种猪瘟冻干疫苗。

背景技术

猪瘟 (ClaSSiealSwinefever，CSF)是由猪瘟病毒 (ClaSSiealSwinefever virus，CSFV)引起猪的一种高度接触性、致死性的传染病。该病唯一的自然宿主是猪，是危害养猪业最严重的传染病之一，死亡率能够达到90%以上(殷震，刘景华，动物病毒学(第一版)fMI，北京，科学出版社， 1997，652一653)。 

20世纪50年代，在各国研制出较为理想的灭活苗的同时，我国学者周泰冲等研究的中国系(C系)猪瘟兔化弱毒疫苗、日本的细胞弱毒疫苗、和法国的Thiverval株等都获得成功并在猪瘟控制中起了得重要的作用。这三大品系疫苗的广泛应用，改变了全世界猪瘟防制的窘迫局面。目前，国内普遍使用的猪瘟活疫苗是1954年培育出猪瘟病毒兔化弱毒株(Hog Cholera Lapinized Virus，HCLV)制备而成的。该疫苗具有免疫力快、免疫谱宽、遗传稳定、无残毒、不引起胎儿畸变等优点。随着畜牧业的不断发展，对疫苗品质和产业化成本的要求也在不断提高，高效、廉价的猪瘟疫苗更是大势所趋。

目前疫苗企业常用的冻干保护剂组方简单，保护性能差。如果在2～8℃条件下保存，保存期只有短短的3～6个月，大多需要在-15℃条件下保存，使疫苗的长期保存和长途运输受到很大限制，加上基层防疫部门缺乏必要的冷冻和冷藏设施，容易因疫苗保存温度不当而使效价大打折扣，最终导致免疫失败而造成疫病流行。所以，冻干保护剂的研究十分必要。

当前，进入中国市场的猪瘟活疫苗均是采用耐热保护剂冷冻而成的，存放温度在2～8℃，存放时间可长达30个月，很好地保证了疫苗的使用效果。而我国的猪瘟活疫苗存放温度仍然是-15℃，进口疫苗对国产疫苗造成了巨大的市场冲击，影响国内生物制品企业的发展。技术的落后也限制了国产疫苗海外市场的拓展，因此，耐热型疫苗的研发势在必行。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪瘟冻干疫苗，即一种可以在2～8℃条件下长期保存仍能保持疫苗效价的耐热型猪瘟冻干疫苗。

本发明的猪瘟冻干疫苗，由作为抗原的猪瘟病毒和疫苗保护剂组成，其中保护剂是由如下质量体积百分比浓度的物质组成的：2.4～4% NZ-胺、0.3～0.5%谷氨酸单钾盐、20～25%蔗糖、1.5～2.5%水解乳蛋白、4～6%明胶；余量为水。

上述的猪瘟冻干疫苗中还加入了青霉素和链霉素，其终浓度分别为青霉素100IU/ml，链霉素80μg/ml。

上述的耐热冻干保护剂，其制备方法如下：

1）首先称取NZ-胺、谷氨酸单钾盐 、蔗糖和水解乳蛋白，溶解后过滤除菌制成过滤液；

2）称取明胶加入到沸水中，搅拌直至完全溶解，高压灭菌制成明胶溶液；

3）将步骤1）制备的过滤液和步骤2）的明胶溶液混合后制成冻干保护剂。

其中步骤1）的过滤除菌是用0.22μm滤膜过滤除菌。

本发明的疫苗所用到的冻干保护剂采用的原料成本低，操作简单，可以大规模生产。由该保护剂制备的疫苗在2～8℃条件下保存24个月后，采用阻断ELISA方法检测猪瘟抗体水平阻断率(%)均在60%以上（判定标准为＞40%为阳性），从而有效的延长了疫苗的保存期限。

具体实施方式

在疫苗的冻干保护剂制备领域中，保护剂组分的选择及配比对疫苗的保存效果具有重要的影响。为了使本发明的猪瘟疫苗能够长期保存，申请人对本发明冻干保护剂的组分进行了长期的研究，并优化了彼此间的配比浓度，从而使各组分之间具有最大的复配效果。

对于本发明冻干保护剂所使用的组分，其性质如下：

1、NZ胺（NZ-Amine AS），又称为酪蛋白的酶促水解物；

2、谷氨酸单钾盐（L-谷氨酸钾盐）：是一种表面活性剂，可降低界面的张力，在冻结和脱水过程中既能降低冰、水界面张力所引起的冻结和脱水变形，又能在复水过程中对活性组分起到润湿剂作用。

3、水解乳蛋白又称水解乳清蛋白，是蛋白酶水解浓缩乳清蛋白或乳白蛋白的产物，含足量的必须氨基酸。

4、蔗糖具有渗透作用，能抑制有害微生物生长，延长产品保藏期，具有很好的水溶性。可提高微生物存活率，形成均一悬液，起到水分缓解作用，可防止活性组分变性。