[发明专利]一种毛细管电泳法拆分格隆溴铵对映体以及对映体杂质检查的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种毛细管电泳法拆分外消旋药物毒蕈碱受体拮抗剂格隆溴铵四种手性对映体以及其对映体杂质检查方法的研究。 

背景技术

格隆溴铵(G1ycopyrronium Bromide)为季铵类抗胆碱药，其结构中含有两个手性碳原子，存在两对对映异构体（RS,SS,SR,RR），即四个手性对映体，国内外己上市产品均为各对映体的混合物，即为外消旋药物，其结构如(Ⅰ)所示。 

(Ⅰ) 

手性对映体尤其是手性药物的拆分近年来已成为分析化学领域的重要课题之一，这是由于药物的药理作用 是通过与体内的大分子之间严格的手性识别和匹配 实现的，即手性药物与生命体中的药物靶点发生作用时具有显著的立体选择性，因此，在许多情况下，其化合物的不同对映体在生 物体内呈现很大的药效学、药动学的差异，毒理作用的表现也会不同甚至完全相反。据研究得知，(3S, 2′R)-格隆溴铵的胆碱能拮抗作用最差，而(3R, 2′S)-格隆溴铵具有最强的胆碱能拮抗作用。

随着人们对手性药物对映体之间生物活性差异的认识，逐渐意识到发展单一对映体药物的重要性，现在世界上各大制药公司对单一对映体药物的日益重视不仅反映在新药开发上，更主要的意义是对已上市外消旋药物再开发成为单一异构体药物，因为这要比开发一个全新药物更省时省钱，且单一对映体药物可能疗效更好、安全性更高、毒副反应较少，而这种疗效最好、安全性高的新药正是国内外医药行业所努力的目标。因此，对外消旋药物通过手性拆分途径开发单一对映体药物其前景非常可观的。 

本专利针对外消旋药物格隆溴铵的手性拆分展开研究，并通过4个对映体单体进行确定峰位，对各对映体进行含量测定（当以某种单体为主药时）及对映体杂质含量测定（当对映体为杂质时），其深层意义为开发单一异构体新药测定其含量、测定杂质（其他三种对映异构体）的含量。 

目前用于手性药物分离的方法常用的方法有手性高效液相色谱法，通过在流动相中加入手性选择剂或采用手性色谱柱进行分离检查，前者往往分离效果不好，专属性不强，后者色谱柱较贵，成本较高，通常需要几类不同的手性液相色谱柱来满足某一特 定的分析要求，要找到能适合拆分格隆溴铵的色谱柱需要很大的消耗，应用的范围较窄等缺点；气相色谱法用于手性药物对映异构体的检查要求样品具有一定的挥发性及热稳定性，应用很有局限性。 

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种毛细管电泳法拆分格隆溴铵对映体的方法,确认格隆溴铵四个对映体单体的峰位，并按杂质对照法计算格隆溴铵中对映体的限度。本发明是这样实现的，它主要包括样品的制备，毛细按电泳条件及分析方法；通过考察毛细管电泳的影响因素，例如，手性选择剂的选择，环糊精的浓度，背景电解质pH，缓冲液浓度，电压以及温度对格隆溴铵及其异构体分离的影响，综合考虑分离时间以及峰形，选择最佳分离条件。在消旋格隆溴铵样品中加入对映体单体，对峰位进行确证。最后，建立了杂质对照法对格隆溴铵中的对映体杂质的进行检测。 

本文考察了β-环糊精，羟丙基β-环糊精，甲基-β-环糊精，羧甲基-β-环糊精和磺化-β-环糊精5种手性选择剂对消旋格隆溴铵的手性拆分，由于磺化-β-环糊精对格隆溴铵的拆分能力最好，最后选择磺化-β-环糊精为手性选择剂。手性选择剂在缓冲液中的浓度范围为0.5~3.0%，最优的浓度为2%。电泳条件参数为：毛细管总长度为50.2cm，有效长度为40cm，毛细管内径为50μm,运行电压为15-30kV，毛细管温度为20-30℃，压力进样0.5psi，5s。pH3.0~5.0范围内，检测模式为“reverse”，即负极进样，正极检测；当pH6.0~8.0范围内，检测模式为“normal”，即正极进样，负极检测。综合考虑分析时间和峰形，选择pH3.5±0.2和pH7.0±0.2。优选的缓冲盐浓度为30mM磷酸盐缓冲液，运行电压20kV，毛细管的温度25℃。 

在消旋格隆溴铵分别加入4个对映体异构体单体样品，在分别在pH3.5和pH7.0条件下对峰位进行确证，得到4个对映体的峰位分别为：RS,SS,SR,RR(pH 3.5±0.2) ，RR,SR,SS,RS（pH 7.0±0.2）。