[发明专利]一种猪轮状病毒冻干疫苗

说明书

技术领域

本发明属于猪的疫苗制备技术领域，具体涉及一种猪轮状病毒冻干疫苗。

背景技术

猪轮状病毒（ＰＲＶ）是轮状病毒引起的一种以腹泻为特征的猪的传染病，主要引起悉生猪和未食初乳的猪发生严重的胃肠炎和绒毛萎缩。临床症状主要表现为恶心、呕吐、腹泻,成年猪一般呈隐性感染。鉴于猪轮状病毒感染普遍,危害大,对猪进行疫苗接种预防猪轮状病毒感染具有重要意义。

目前，弱毒活疫苗是预防畜禽传染病的主要疫苗之一，在我国动物疫苗中，活疫苗占相当大的比例。但目前国内疫苗企业常用的冻干保护剂组方简单，保护性能差。如果在2～8℃条件下保存，保存期只有短短的3～6个月，大多需要在-15℃条件下保存，使疫苗的长期保存和长途运输受到很大限制，加上基层防疫部门缺乏必要的冷冻和冷藏设施，容易因疫苗保存温度不当而使效价大打折扣，最终导致免疫失败而造成疫病流行。所以，耐热保护剂的研究十分必需。但目前还没有一种可以有效的进行长期保存的猪轮状病毒冻干疫苗。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪轮状病毒冻干疫苗，即一种可长期保存仍能保持疫苗效价的耐热型猪轮状病毒冻干疫苗，从而弥补现有技术的不足。

本发明的猪轮状病毒冻干疫苗，由猪轮状病毒抗原和保护剂组成，其中保护剂是由如下质量百分比浓度的物质组成的：2.4～4% NZ-胺、0.3～0.5%谷氨酸单钾盐、20～25%蔗糖、1.5～2.5%水解乳蛋白、4～6%明胶；余量为水。

上述的猪轮状病毒冻干疫苗中还加入了青霉素和链霉素，其终浓度分别为青霉素100IU/ml，链霉素80μg/ml。

上述的耐热冻干保护剂，其制备方法如下：

1）首先称取NZ-胺、谷氨酸单钾盐 、蔗糖 和水解乳蛋白，溶解后过滤除菌制成过滤液；

2）称取明胶加入到70-80℃注射用水中，搅拌直至完全溶解，高压灭菌制成明胶溶液；

3）将步骤1）制备的过滤液和步骤2）的明胶溶液混合后，制成冻干保护剂。

其中步骤1）的过滤除菌是用0.22μm滤膜过滤除菌。

本发明的疫苗所用到的冻干保护剂采用的原料成本低，操作简单，可以大规模生产。由该保护剂制备的疫苗在2～8℃条件下保存24个月后，疫苗效价均≥10^6.5TCID₅₀/头份（国标），从而有效的延长了疫苗的保存期限。

具体实施方式

在疫苗的冻干保护剂制备领域中，保护剂组分的选择及配比对疫苗的保存效果具有重要的影响。为了使本发明的猪瘟疫苗能够长期保存，申请人对本发明冻干保护剂的组分进行了长期的研究，并优化了彼此间的配比浓度，从而使各组分之间具有最大的复配效果。

 对于本发明冻干保护剂所使用的组分，其性质如下：

1、NZ胺（NZ-Amine AS），又称为酪蛋白的酶促水解物；

2、谷氨酸单钾盐（L-谷氨酸钾盐）：是一种表面活性剂，可降低界面的张力，在冻结和脱水过程中既能降低冰、水界面张力所引起的冻结和脱水变形，又能在复水过程中对活性组分起到润湿剂作用。

3、水解乳蛋白又称水解乳清蛋白，是蛋白酶水解浓缩乳清蛋白或乳白蛋白的产物，含足量的必须氨基酸。

4、蔗糖具有渗透作用，能抑制有害微生物生长，延长产品保藏期，具有很好的水溶性。可提高微生物存活率，形成均一悬液，起到水分缓解作用，可防止活性组分变性。

对于本发明冻干保护剂的组分可以选用任一市售的产品，例如NZ-胺购自SIGMA公司，谷氨酸单钾盐购自SIGMA，水解乳蛋白购自GIBCO，蔗糖购自德国默克，明胶购自SIGMA。

本发明具体实施例所用到的猪轮状病毒毒株，购自中国兽医药品监察所，中国兽医微生物菌种保藏管理中心，编号为 CVCCAV58。但也可选用其它报道的，能用做疫苗的猪轮状病毒毒株。

下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。

实施例1

在疫苗的冻干保护剂制备领域中，保护剂组分的选择及配比对疫苗的保存效果具有重要的影响。为了使本发明的猪瘟疫苗能够长期保存，申请人对本发明冻干保护剂的组分进行了长期的研究，并优化了彼此间的配比浓度，从而使各组分之间具有最大的复配效果。

一、冻干保护剂的配制：分A液和B液两部分。