[发明专利]一种猪繁殖与呼吸综合征冻干疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于家畜疫苗制备技术领域，具体涉及一种猪繁殖与呼吸综合征冻干疫苗及其制备方法。

背景技术

冻干保护剂可能影响生物制品的质量、效价和稳定性，耐热冻干保护剂有免疫活性而无药理活性，它不仅具有保护制品生物学活性的作用，而且具有赋形剂和抗氧化剂的作用，直接与疫苗的滴度和稳定性相关联，可在冻干和保存时维持疫苗的稳定性，确保制品在2～8℃条件下，保存期可长达24个月，效价无明显下降，即使在37℃条件下也可以保存十天以上，从而解决了常规疫苗在长途运输、长期保存和使用过程中不耐热、储存温度低、保存期短和苛刻的冷冻条件造成大量能源浪费等难题。但国内疫苗企业常用的冻干保护剂组方简单，保护性能差。如果在2～8℃条件下保存，保存期只有短短的3～6个月，大多需要在-15℃条件下保存。这就要求疫苗在保存、运输和使用过程中尽可能在低温条件下进行，否则疫苗的效价就会大打折扣。而在疫苗生产、运输和使用过程中，如果任何一个环节的冷链系统控制不当，高温环境就会导致疫苗效力下降，最终因免疫失败而造成疫病流行。因此，提供耐热型的疫苗就具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪繁殖与呼吸综合征冻干疫苗，即一种可以在2～8℃条件下长期保存仍能保持疫苗效价的耐热型猪繁殖与呼吸综合征冻干疫苗。

本发明的猪繁殖与呼吸综合征冻干疫苗，由猪繁殖与呼吸综合征（简称蓝耳病）病毒抗原和保护剂组成，其中保护剂是由如下质量百分比浓度的物质组成的：2～3% NZ-Amine AS、0.1～0.3%谷氨酸单钾盐、10～15%蔗糖、1～2%水解乳蛋白、10～20%水解明胶、0.1～0.2%维生素C；余量为水。

上述的猪繁殖与呼吸综合征冻干疫苗中还加入了青霉素和链霉素，其终浓度分别为青霉素100IU/ml，链霉素80μg/ml。

上述的耐热冻干保护剂，其制备方法如下：

1）首先称取NZ-Amine AS、谷氨酸单钾盐、蔗糖 、维生素C和水解乳蛋白，溶解后过滤除菌制成过滤液； 所使用的微孔滤膜孔径为0.22μm；            

2）称取水解明胶加入到70-80℃注射用水中，搅拌直至完全溶解，高压灭菌制成明胶溶液；高压灭菌条件为116℃，20min；

3）将步骤1）制备的过滤液和步骤2）的明胶溶液混合后，制成冻干保护剂。

本发明的耐热保护剂能最大限度地减少制品在分装及冻干过程中各种理化因素对病毒活性的损伤，使冻干前后病毒的效价损失较少，不超过0.2个滴度；

本发明的耐热保护剂活疫苗耐老化程度高，在37℃条件下保存10天病毒的损失率不超过0.5个滴度，在2～8℃条件下保存24个月，疫苗效价降低较少，有效解决了常规疫苗在运输和保存过程中需要严格的冷链条件而带来的能源浪费和储存不便的问题。本发明的耐热冻干保护剂不仅耐热性能好、能有效保护病毒的活性，而且具有配方简单、成本低、适用于大批量生产等优点，降低了生产成本。

具体实施方式

在疫苗的冻干保护剂制备领域中，保护剂组分的选择及配比对疫苗的保存效果具有重要的影响。为了使本发明的猪瘟疫苗能够长期保存，申请人对本发明冻干保护剂的组分进行了长期的研究，并优化了彼此间的配比浓度，从而使各组分之间具有最大的复配效果。

对于本发明冻干保护剂所使用的组分，其性质如下：

1、NZ胺（NZ-Amine AS），又称为酪蛋白的酶促水解物；

2、谷氨酸单钾盐（L-谷氨酸钾盐）：是一种表面活性剂，可降低界面的张力，在冻结和脱水过程中既能降低冰、水界面张力所引起的冻结和脱水变形，又能在复水过程中对活性组分起到润湿剂作用。

3、水解乳蛋白又称水解乳清蛋白，是蛋白酶水解浓缩乳清蛋白或乳白蛋白的产物，含足量的必须氨基酸。

4、蔗糖具有渗透作用，能抑制有害微生物生长，延长产品保藏期，具有很好的水溶性。可提高微生物存活率，形成均一悬液，起到水分缓解作用，可防止活性组分变性。

对于本发明冻干保护剂的组分可选用市售的产品，例如NZ-Amine AS、谷氨酸单钾盐、水解明胶均购自SIGMA，水解乳蛋白、维生素C购自GIBCO，蔗糖购自德国默克。

本发明所涉及的猪繁殖与呼吸综合征病毒选用已有的毒株，例如高致病蓝耳病毒株TJM-F92株，或经典毒株CH-1R株。

下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。

一、冻干保护剂的配制

本发明的冻干保护剂的配比如表1所示。