[发明专利]一种基因工程热稳定疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种具有自矿化能力的疫苗，其特征在于：所述疫苗的表面包含多肽，所述的多肽具有诱导无机物矿化的能力，并且所述的多肽通过基因工程手段的方法引入，所述的无机物为含钙矿物，所述的多肽为含有羧基的多肽。

2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于：所述的含钙矿物选自磷酸钙、碳酸钙、草酸钙中的任意一种或任意多种。

3.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于：所述的含有羧基的多肽为含有天冬氨酸和/或谷氨酸的多肽。

4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于：所述的多肽包含如下所示序列其中之一：

X-X-Lys(X)-X-X-Pro-X-Ser-Gln-Arg-Arg-Ile-Gly-Arg-Phe-Gly；

X-X-Ser-Ser-X-X-Lys-Phe-Leu-Gly-Arg-Phe-Gly；

X-X-Ser-Ser-(X-X)_n；

Pro-(Phe-X)_n-Pro；

其中X为Asp或Glu，n为1-6。

5.根据权利要求1-4任一项所述的疫苗，其特征在于：所述疫苗为单价疫苗或多价疫苗。

6.根据权利要求1-4任一项所述的疫苗，其特征在于：所述疫苗为病毒疫苗。

7.根据权利要求6所述的疫苗，其特征在于：所述的病毒疫苗选自脊髓灰质炎疫苗、肠道病毒疫苗、腺病毒疫苗、乙型脑炎疫苗、水痘疫苗、轮状病毒疫苗、甲型肝炎疫苗、黄热疫苗、流感疫苗、风疹疫苗、艾滋病疫苗。

8.一种疫苗组合物，其特征在于：所述的疫苗组合物包含权利要求1-7任一项所述的具有自矿化能力的疫苗，以及提高疫苗稳定性或免疫原性的成分。

9.权利要求1-7任一项所述的具有自矿化能力疫苗的制备方法，包括如下步骤：

(1)构建疫苗的基因组克隆，得到疫苗核酸序列；

(2)将编码多肽的核酸序列插入步骤(1)获得的疫苗核酸序列的目的位置，得到疫苗的重组克隆；

(3)将步骤(2)得到疫苗的重组克隆在细胞内表达，得到具有自矿化能力的疫苗。

10.一种疫苗组合物，其特征在于：所述的疫苗组合物包含权利要求9所述的方法制得的具有自矿化能力的疫苗，以及提高疫苗稳定性或免疫原性的成分。

11.一种具有热稳定性的矿化疫苗，其特征在于：所述的矿化疫苗包括矿化的无机物外壳和权利要求1-7任一项所述的具有自矿化能力的疫苗，所述的无机物外壳包被在所述的具有自矿化能力的疫苗的表面。

12.根据权利要求11所述的矿化疫苗，其特征在于：所述的无机物外壳选自磷酸钙、碳酸钙、草酸钙。

13.一种疫苗组合物，其特征在于：所述的疫苗组合物包含权利要求11或12所述的矿化疫苗，以及提高疫苗稳定性或免疫原性的成分。

14.权利要求1-7任一项所述的具有自矿化能力的疫苗的矿化方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)配制初始体系：将具有自矿化能力的疫苗配制成疫苗溶液，向疫苗溶液中加入Ca²⁺离子和酸根离子，所述的酸根离子选自磷酸根离子、碳酸根离子、草酸根离子的任意一种或任意多种；

(2)将所述初始体系在20℃～37℃、pH≥6.0条件下进行孵育0.5h以上，制得具有热稳定性的矿化疫苗。

15.根据权利要求14所述的矿化方法，其特征在于：所述步骤(1)、步骤(2)中pH为6.5～9.5。

16.根据权利要求14所述的矿化方法，其特征在于：所述步骤(1)、步骤(2)中pH为pH为7.2。

17.根据权利要求14所述的矿化方法，其特征在于：所述步骤(2)的孵育时间为1h～12h。

18.根据权利要求14所述的矿化方法，其特征在于：所述步骤(2)的孵育时间为2h。

19.根据权利要求14所述的矿化方法，其特征在于：所述初始体系中，所述Ca²⁺离子浓度为4mM以上。