[发明专利]用于纯化低分子肝素的阴离子交换色谱填料，其制备方法，其填充的色谱柱及纯化方法

权利要求书

1.用于纯化低分子肝素的阴离子交换色谱填料，其特征在于，所述阴离子交换色谱填料的基质为交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯-甲基丙烯酸乙二醇双酯的多孔球形颗粒；所述阴离子交换色谱填料的粒径范围包含在30-150μm的范围中，平均粒径为50-80μm，孔径范围包含在30-180nm的范围中。

2.如权利要求1所述的阴离子交换色谱填料，其中所述阴离子交换色谱填料的表面电荷密度为350-2350μmol/g，比表面积为33-95平方米/g，孔隙率为25-86%。

3.制备如权利要求1所述的阴离子交换色谱填料的方法，包括：用悬浮聚合法制备聚甲基丙烯酸环氧丙酯-甲基丙烯酸乙二醇双酯基质的微球，对所述微球进行洗涤及筛分，再使用胺类亲核试剂在所述筛分后得到的微球表面键合阴离子交换基团；

其特征在于，所述悬浮聚合法的步骤为：

a、在反应釜中加入分散稳定剂、静电保护剂和水，密闭所述反应釜，搅拌所述反应釜中的物料同时升高釜内温度至60-85℃，直至所述分散稳定剂和所述静电保护剂充分溶解后停止搅拌，得到水相；

b、取甲基丙烯酸环氧丙酯、甲基丙烯酸乙二醇双酯、致孔剂和引发剂并将其混合得到混合物料，将所述混合物料超声的同时搅拌，至所述引发剂完全溶解，得到有机相；

c、将所述水相升温至30℃，加入所述有机相并在30℃下搅拌直至形成均匀油状乳液体系，得到混合乳液；和

d、将所述混合乳液加热至75-80℃引发聚合反应，所述聚合反应的时长为6-30小时，得到所述聚甲基丙烯酸环氧丙酯-甲基丙烯酸乙二醇双酯基质的微球。

4.如权利要求3所述的制备阴离子交换色谱填料的方法，其中所述分散稳定剂是聚乙烯醇，所述分散稳定剂与所述水相的质量体积比为0.03-1%；所述静电保护剂是氯化钠，所述静电保护剂与所述水相的质量体积比为1-16.7%。

5.如权利要求3所述的制备阴离子交换色谱填料的方法，其中所述有机相中，所述致孔剂的体积分数为20-71%；所述致孔剂是良溶剂和不良溶剂中的一种或其组合，所述良溶剂选自甲苯、异丙苯和二甲苯中的一种或其任意组合；所述不良溶剂选自异戊醇、正辛醇、异辛醇和正十二醇中的一种或其任意组合。

6.如权利要求3所述的阴离子交换色谱填料的制备方法，其中所述引发剂为过氧化苯甲酰或2,2’-偶氮二异戊腈，所述引发剂的用量与所述甲基丙烯酸环氧丙酯和所述甲基丙烯酸乙二醇双酯两者用量和的质量体积比为0.4-3%。

7.如权利要求3所述的制备阴离子交换色谱填料的方法，其中所述胺类亲核试剂为二乙胺、三乙烯四胺、五乙烯六胺、五乙烯六胺或N,N’-二乙基乙二胺。

8.如权利要求3所述的制备阴离子交换色谱填料的方法，其中所述表面键合的反应温度为0-50℃，反应时长为1-10小时。

9.用于纯化低分子肝素的阴离子交换色谱柱，其特征在于，使用权利要求1所述的阴离子交换色谱填料填充而成。

10.纯化低分子肝素的方法，其特征在于，将待纯化的低分子肝素样品通过权利要求9所述的阴离子交换色谱柱进行纯化。