[发明专利]一种特异识别并中和草鱼呼肠孤病毒的单链抗体19B7

说明书

技术领域

本发明涉及水产养殖品种病原体的检测以及防治技术，具体涉及一种特异识别并中和草鱼呼肠孤病毒（GCRV）的单链抗体。

背景技术

草鱼是我国淡水养殖业的重要品种，其在幼鱼时期易感染草鱼呼肠孤病毒，且致死率高达80%，目前该病毒侵染细胞的机理尚未得到揭示，因此利用中和抗体研究病毒对宿主细胞的吸附及侵染将会为草鱼出血病的防治提供新的思路。

草鱼呼肠孤病毒在结构上由双层蛋白衣壳组成，其中外层蛋白衣壳由衣壳蛋白VP5-VP7异源二聚体构成。邵玲等（Shao et al.,Antibodies against outer-capsid proteins of grass carp reovirus expressed in E.coli are capable of neutralizing viral infectivity,Virology Journal,2011,8:347）及和永杏等（He et al.,Prokaryotic expression and purification of grass carp reovirus capsid protein VP7 and its vaccine potential,African Journal of Microbiology Research,2011,5(13):1643-1648；He et al.,The use of an in vitro microneutralization assay to evaluate the potential of recombinant VP5 protein as an antigen for vaccinating against Grass carp reovirus.Virology Journal,2011,8:132）分别制备了GCRV衣壳蛋白VP5和VP7的多抗血清，并证实两种多抗血清均能够中和GCRV，说明GCRV的衣壳蛋白VP5和VP7在病毒侵染细胞过程中起着重要的作用。但多抗血清中所含的抗体是多克隆抗体，它们是识别同一抗原不同位点的混合抗体，因此VP5与VP7的多抗血清均无法特异性地研究VP5或VP7某一特定区域在病毒吸附与侵染细胞过程中的作用，这一缺陷限制了它们在病毒和细胞相互作用研究中的进一步应用。杨倩等（杨等，一株草鱼呼肠孤病毒检测用单克隆抗体的制备及其特性，中国免疫学杂志，2012,28（3）：240—241）利用传统杂交骨髓瘤方法得到了识别衣壳蛋白VP7的单克隆抗体，为建立快速检测GCRV的方法奠定了基础。但是传统的单克隆抗体制备往往价格高昂，制备周期长，并且需要免疫小鼠，因此限制了其大批量的生产和应用。并且到目前为止，尚未有对GCRV具有中和效应的单克隆抗体报道。

噬菌体展示单链抗体主要通过将工程化的抗体可变区基因片段插入到噬菌体外壳蛋白基因中，达到抗体可变区与噬菌体外壳蛋白融合表达并展示于噬菌体表面的目的。通过几轮对目的抗原的淘选，目标抗体即可快速且廉价地获得，此单链抗体在大肠杆菌中表达分泌，可大批量制备；另外，由于不需要免疫动物，通过噬菌体展示技术获得单克隆抗体的方法更方便快捷。

发明内容：

本发明的目的是提供一种特异识别并中和草鱼呼肠孤病毒（专利号：200410060881.2）的单链抗体19B7，该单链抗体19B7通过噬菌体抗体展示技术制备。本发明的优点在于，单链抗体19B7可以特异性识别草鱼呼肠孤病毒873毒株的衣壳蛋白VP7，并能够中和草鱼呼肠孤病毒873毒株，阻止其侵染细胞。本发明成本低、制备简单、可大量制备，并可以单链抗体19B7为分子工具进一步研究草鱼呼肠孤病毒873毒株侵染宿主细胞的机理。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种特异识别并中和草鱼呼肠孤病毒的单链抗体19B7的DNA序列：