[发明专利]从血浆组分沉淀中提取人凝血因子Ⅷ和人纤维蛋白原的工艺

权利要求书

1.一种从血浆组分沉淀中提取人凝血因子Ⅷ和人纤维蛋白原的工艺，包括以下步骤：

将新鲜血浆进行一次沉淀，从血浆中共沉出凝血因子Ⅷ和组纤维蛋白原沉淀；

将一次沉淀进行悬浮；

将悬浮液进行离心分离出上清液；

将离心分离的上清液进行病毒灭活；以及

将上清液进行层析精制，分别得到用于制备人凝血因子Ⅷ制品的人凝血因子Ⅷ精制液和用于制备人纤维蛋白原制品的层析流出液。

2.根据权利要求1所述的从血浆组分沉淀中提取人凝血因子Ⅷ和人纤维蛋白原的工艺，其特征在于，所述一次沉淀的步骤包括以下步骤：

将新鲜冰冻血浆通过0～4℃水浴融化；

降温至0℃左右后，用pH4.0的醋酸/醋酸钠缓冲液调整pH至7.0～7.2；

添加-15℃以下的50%乙醇至6.6%，反应液降温至-1.0～-2.0℃，继续搅拌1小时以上进行离心分离得到一次沉淀。

3.根据权利要求2所述的从血浆组分沉淀中提取人凝血因子Ⅷ和人纤维蛋白原的工艺，其特征在于，所述将一次沉淀进行悬浮的步骤包括以下步骤：

将一次沉淀粉碎投入溶解液，保持20～30℃的温度条件下，搅拌30分钟以上使沉淀完全溶解；

用浓度为1mol/L冰醋酸将冷沉淀溶解液的pH调节到6.8～7.2，搅拌30分钟后按每千克悬浮液添加3g氢氧化铝凝胶的比例添加凝胶；

搅拌5分钟以上，用1mol/L冰醋酸将悬浮液的pH调节到5.4～5.6；

其中，每千克一次沉淀所需的溶解液按照3L注射用水、9000IU肝素钠、30g95%酒精的比例配制，温度20～30℃。

4.根据权利要求3所述的从血浆组分沉淀中提取人凝血因子Ⅷ和人纤维蛋白原的工艺，其特征在于，所述将悬浮液进行离心分离出上清液的步骤包括以下步骤：

将悬浮液冷却到14～20℃，进行离心分离，离心时的进液速度为≤1000ml/分钟/台；

收集上清液，用孔径为1.0μm和0.2μm的过滤器进行串联过滤至收集罐内。

5.根据权利要求4所述的从血浆组分沉淀中提取人凝血因子Ⅷ和人纤维蛋白原的工艺，其特征在于，所述将离心分离的上清液进行病毒灭活的步骤包括以下步骤：

将离心上清液温度调节至25～26℃，然后添加吐温-80至1%，添加磷酸三丁酯至0.3%，搅拌30分钟；

将药液移送至病毒灭活罐，以40～60rpm的速度搅拌，在24～26℃条件下，进行时长为6小时的S/D病毒灭活。

6.根据权利要求5所述的从血浆组分沉淀中提取人凝血因子Ⅷ和人纤维蛋白原的工艺，其特征在于，所述层析精制的步骤包括以下步骤：

配制缓冲液，按照1L：0.08L的比例向S/D处理后药液中添加缓冲液，搅拌混匀后用0.5mol/L的盐酸将pH调节至6.8～7.2；

将药液以1.8～2.2L/分的速度通过平衡后的DEAE-650M树脂；

上样结束后，分别用平衡液和洗涤液洗涤树脂；以及

用洗脱液洗脱树脂得到人凝血因子Ⅷ精制液；

其中，所述缓冲液按照氯化钠35g/L、柠檬酸钠29.4g/L、氯化钙1.5g/L、甘氨酸90g/L的比例进行配制，所述平衡液按照氯化钠7g/L、柠檬酸钠2.94g/L、氯化钙0.15g/L、甘氨酸9g/L的比例进行配制，所述洗涤液按照氯化钠13.3g/L、柠檬酸钠2.94g/L、氯化钙0.15g/L、甘氨酸9g/L的比例进行配制，所述分别用平衡液和洗涤液洗涤树脂的步骤中的层析流出液用于人纤维蛋白原的制备，所述洗脱液按照氯化钠14.5g/L、柠檬酸钠2.94g/L、氯化钙0.15g/L、甘氨酸9g/L的比例进行配制。