[发明专利]人源性尖吻蝮蛇蛇毒免疫ScFv抗体库及其构建方法

权利要求书

1.人源性尖吻蝮蛇蛇毒免疫ScFv抗体库的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

A人特异性IgG轻链PCR扩增

选用人特异性IgG轻链λ型的特异性引物进行PCR扩增，得λ型的PCR产物，选用人特异性IgG轻链κ型的特异性引物进行PCR扩增，得κ型的PCR产物；

B人特异性IgG的γ类重链PCR扩增

选用人特异性IgG的γ类重链的特异性引物进行PCR扩增，得重链PCR产物；

C轻链基因库的构建

将步骤A所得的各个λ型的PCR产物和各个κ型的PCR产物与噬菌体酶切后连接入转化体细菌，得轻链基因库；

D人源性尖吻蝮蛇毒毒素免疫噬菌体ScFv抗体库的构建

将步骤B所得的重链PCR产物与步骤C所得轻链基因库质粒酶切后进行连接，转入转化体细菌，得人源性尖吻蝮蛇毒毒素免疫噬菌体ScFv抗体库。

2.根据权利要求1所述的人源性尖吻蝮蛇蛇毒免疫ScFv抗体库的构建方法，其特征在于：所述步骤A中，所述PCR扩增是以阳性全血提取的总mRNA转化的cDNA为模板，人特异性IgG轻链特异性引物如SEQ ID NO:7-15所示；所述引物上游引物和下游引物进行两两配对，得PCR产物1-10。

3.根据权利要求1所述的人源性尖吻蝮蛇蛇毒免疫ScFv抗体库的构建方法，其特征在于：所述步骤B中，所述PCR扩增是以阳性全血提取的总mRNA转化的cDNA为模板，人特异性IgG的γ类重链的特异性引物,其正向引物如SEQ ID NO:1-3所示，其反向引物如SEQ ID NO:4-6所示，进行两两配对，得PCR产物11-19。

4.根据权利要求2所述的人源性尖吻蝮蛇蛇毒免疫ScFv抗体库的构建方法，其特征在于，人特异性IgG轻链特异性引物，将如SEQ ID NO:7所示的引物和如SEQ ID NO:26所示的引物混合，得上游混合引物1，将如SEQ ID NO:8所示的引物和如SEQ ID NO:27所示的引物混合，得上游混合引物2，将如SEQ ID NO:11所示的引物和如SEQ ID NO:29所示的引物混合，得上游混合引物3，将如SEQ ID NO:12所示的引物和如SEQ ID NO:30所示的引物混合，得上游混合引物4，将如SEQ ID NO:13所示的引物和如SEQ ID NO:31所示的引物混合，得上游混合引物5；

将如SEQ ID NO:9所示的引物和如SEQ ID NO:28所示的引物混合，得下游混合引物1；将如SEQ ID NO:14所示的引物和如SEQ ID NO:28所示的引物混合，得下游混合引物32；

所述引物上游引物混合物和下游引物混合物进行两两配对，得PCR产物1-10。

5.根据权利要求3所述的人源性尖吻蝮蛇蛇毒免疫ScFv抗体库的构建方法，其特征在于，人特异性IgG的γ类重链的特异性引物，将如SEQ ID NO:1所示的引物和如SEQ ID NO:21所示的引物混合，得上游混合引物1，将如SEQ ID NO:2所示的引物和如SEQ ID NO:22所示的引物混合，得上游混合引物2，将如SEQ ID NO:3所示的引物和如SEQ ID NO:23所示的引物混合，得上游混合引物3；

将如SEQ ID NO:4所示的引物和如SEQ ID NO:24所示的引物混合，得下游混合引物1；将如SEQ ID NO:5所示的引物和如SEQ ID NO:25所示的引物混合，得下游混合引物2；将如SEQ ID NO:6所示的引物作下游引物；

所述引物上游引物混合物和下游引物混合物/下游引物进行两两配对，得PCR产物11-19。