[发明专利]CRP非免疫纳米金检测试纸条及其制备

权利要求书

1.检测CRP的非免疫纳米金试纸条的制备方法，所述试纸条包括样品垫、纳米金结合垫、硝酸纤维膜、吸水垫和支撑板，其特征在于，该制备方法包括：

A，将标记有生物素的第一寡核苷酸标记到纳米金颗粒上，获得第一寡核苷酸标记的纳米金颗粒；

B，将步骤A获得的第一寡核苷酸标记的纳米金颗粒喷在结合垫上，获得纳米金结合垫；

C，将第二寡核苷酸喷在硝酸纤维膜上形成检测线，将亲和素(优选是链球菌亲和素)喷在硝酸纤维膜上形成质控线，获得带有检测线和质控线的硝酸纤维膜，其中检测线和质控线间距为0.4-1cm，优选为0.6cm；和

D，以样品垫、纳米金结合垫、带有检测线和质控线的硝酸纤维膜和吸水垫这4部件依次为序排列，相邻两部件间边缘接触或重合(优选重合1-3mm，如重合2mm)，固定(如热层压固定或粘合固定)在支撑板上，制成该检测CRP的非免疫纳米金检测试纸条，

其中，第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的序列不同。

2.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中样品垫是经过样品垫处理液浸泡处理的，优选其中样品垫处理液是含1-5％(W/W)酪蛋白、0.1-1％(W/W)聚乙烯醇和0.05-0.5％(W/W)吐温-20的PBS溶液(pH7.0-7.6)，更优选其中样品垫处理液是含3％(W/W)酪蛋白、0.5％(W/W)聚乙烯醇和0.1％(W/W)吐温-20的20mMPBS溶液(pH7.2)。

3.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中第一寡核苷酸标记的纳米金颗粒是稀释成0.05-2mg/ml(优选0.25mg/ml)的溶液以10-100微升/cm(优选50微升/cm)的量喷在结合垫上。

4.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中第二寡核苷酸是稀释成0.1-2mg/ml(优选0.5mg/ml)的溶液以0.5-5微升/cm(优选1微升/cm)的量喷在硝酸纤维膜上。

5.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中亲和素是稀释成0.2-3mg/ml(优选lmg/ml)的溶液以0.5-5微升/cm(优选1微升/cm)的量喷在硝酸纤维膜上。

6.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中步骤C是将第二寡核苷酸喷在硝酸纤维膜上形成检测线，将亲和素(优选是链球菌亲和素)喷在硝酸纤维膜上形成质控线，晾干后紫外线交联并浸泡在封闭液中，然后烘干，获得带有检测线和质控线的硝酸纤维膜。

7.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的序列分别选自如下序列：

5’-atgggggggtatgatt-3’；

5’-atgggtgggtatgggt-3’；

5’-aagcgggtgggtgtgt-3’；

5’-tgggtggggggtgggggttgttgggctgtt-3’；

5’-tgggtgggcggggtgggttgttgggcggtt-3’；

5’-tgggggagggggcggggccgtagggtgggt-3’；

5’-cgggtggggggtgggggtcgccgggtcgct-3’；或

5’-ggggtggggggtgggggtagttgggtcgct-3’。

8.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中纳米金结合垫与硝酸纤维膜重合在硝酸纤维膜靠近检测线的一侧，而且吸水垫与硝酸纤维膜重合在硝酸纤维膜靠近质控线的一侧。

9.权利要求1-9之任一所述的制备方法制备的纳米金试纸条，优选该纳米金试纸条是如实施例1、2和/或3制备的。

10.权利要求9所述的纳米金试纸条在制备用于检测CRP的试剂盒中的应用，优选其中该试剂盒还包括标准图样片。