[发明专利]一种确定蚯蚓中土霉素残留浸提剂的实验方法

权利要求书

1.一种确定蚯蚓中土霉素残留浸提剂的实验方法，其特征在于包括以下步骤： 

1）将新鲜的蚯蚓样品置于瓷质研钵中，加入无水Na₂SO₄，在氮气条件下研磨制备组织浆液，转移磨碎后的组织浆液，用浸提剂反复清洗研钵至洗净残留物，收集全部清洗液并加入浸提剂至所需的体积，得到浸提液，所述浸提剂为具有潜力的各种浸提剂；

2）将上述浸提液在18-25℃、200r/min条件下振荡20min，然后在100W条件下超声提取20min，用冷冻离心机在2500rmp、4℃条件下进行高速离心分离25min，收集上清液；

3）将上述上清液过0.45μm聚四氟乙烯滤膜去除杂质，采用高效液相色谱测定土霉素含量；

4）分别计算各种浸提剂对土霉素的加标回收率，选择提取率在80%以上的浸提剂，在此基础上，选择同一浸提剂对土霉素浸提率的重复性差异性较小、浸提比较稳定的浸提剂，从而确定对蚯蚓中土霉素提取比较适合的浸提剂；

5）采用上述确定的浸提剂，分别进行一次浸提和二次浸提，通过方差分析进行比较其浸提效果的差异性，并进一步对其浸提稳定性进行检测，在一次浸提和二次浸提总量之间不呈现显著差异的基础上，选择一次浸提对土霉素进行浸提，从而简化提取次数，提高提取效率。

2.根据权利要求1所述确定蚯蚓中土霉素残留浸提剂的实验方法，其特征在于：所述具有潜力的各种浸提剂包括pH为4.7的柠檬酸酸化乙腈、0.1 mol/L pH4.0±0.05的Na₂EDTA-McIlvaine、浓度为5w%的高氯酸、体积比为1:1的甲醇与柠檬酸的混合液、体积比为1:1的甲醇与EDTA缓冲液的混合液和不同体积比的甲醇与水的混合液。

3.根据权利要求1所述确定蚯蚓中土霉素残留浸提剂的实验方法，其特征在于：所述蚯蚓样品与无水NaSO₄的质量比为3：1。

4.根据权利要求1所述确定蚯蚓中土霉素残留浸提剂的实验方法，其特征在于：所述蚯蚓样品与浸提液的用量比为1.50g/20mL。

5.根据权利要求1所述确定蚯蚓中土霉素残留浸提剂的实验方法，其特征在于：所述实验确定的适合于蚯蚓中土霉素残留一次浸提的浸提剂为体积比为4:1的甲醇与水的混合液。