[发明专利]来源于产酶溶杆菌的2,5-二酮哌嗪类二肽及其制备和应用

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种来源于产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）的2,5-二酮哌嗪类二肽，及其制备与应用，以及产所述2,5-二酮哌嗪类二肽的内生细菌——产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）R-2-1。

（二）背景技术

致病菌不仅严重危害着人体的健康，而且威胁着农业生产，给世界各国人民经济和生活带来很大的损失。我国现有杀菌剂虽然种类众多，但已不能有效地抑制新型致病菌和强抗性致病菌。因此，杀菌剂必须不断创新。生物药物具有高效、低毒、安全、环境友好等优点，迎合了我国药物发展的需求，未来微生物药物产业具有很大的发展潜力。

扩大微生物资源是开发新型杀菌剂的重要途径之一。植物内生菌是一类特殊的微生物，其生活在健康植物组织细胞间或组织内，没有引起宿主植物任何明显病害症状，是植物内的正常菌群。大量研究表明，植物内生菌分布广，种类多，具有重要生理和生态作用，植物内生菌具有丰富的化学多样性，能够代谢化学结构独特、活性显著的物质。到目前为止，尚未见从黄花蒿分离到内生菌产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）及其代谢2,5-二酮哌嗪类二肽的报道。

（三）发明内容

本发明目的是提供一种2,5-二酮哌嗪类二肽及其制备与应用，以及产所述2,5-二酮哌嗪类二肽的内生细菌——产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）R-2-1。

本发明采用的技术方案是：

一种来源于产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）的2,5-二酮哌嗪类二肽，其结构如式（I）所示：

所述内生细菌产酶溶杆菌R-2-1分离方法为：取来源于浙江天目山的新鲜健康黄花蒿茎（Artemisia annua Linn.，菊科、蒿属、黄花蒿种），装入保鲜袋中密封标记，24h内进行内生菌分离。黄花蒿根用清水洗净，切成1cm左右的小段后依次浸泡于体积浓度75%乙醇水溶液1min、质量浓度1%次氯酸钠水溶液10min、体积浓度75%乙醇水溶液1min进行预处理。取预处理后的黄花蒿根用双抗WA培养基平板培养至菌落从切口处长出，挑取菌落转接至LB培养基进行内生真菌的分离，经菌落形态学观察和16S rRNA分子鉴定为产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes），命名为内生细菌产酶溶杆菌R-2-1（Lysobacter enzymogenes）。双抗WA培养基终浓度组成：200IU/mL两性霉素B、150IU/mL链霉素、20g琼脂、1L蒸馏水，自然pH值。LB培养基终浓度组成：酵母提取物5g/L，胰蛋白胨10g/L，NaCl10g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH7.4。

内生细菌产酶溶杆菌R-2-1形态特征和培养特征为：菌落呈浅黄色，G^-，细胞杆状，芽孢染色为紫色，甲基红试验阳性，NaCl含量范围0～3%，具有氧化酶活性和水解酪素、羧甲基纤维素活性，DNA中（G+C）含量66.9%，无硝酸盐还原力。

该菌16S rRNA序列为:

1tgcagtcgaa cggcagcaca gaggagcttg ctccttgggt ggcgagtggc ggacgggtga

61ggaatacgtc ggaatctgcc tatttgtggg ggataacgta gggaaactta cgctaatacc

121gcatacgacc tacgggtgaa agtgggggac cgcaaggcct cacgcagata gatgagccga

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