[发明专利]一种检测猪外周血和脾脏淋巴细胞膜表面分子的样品制备试剂盒及其制备方法在审
| 申请号： | 201310292681.9 | 申请日： | 2013-07-12 |
| 公开（公告）号： | CN103424294A | 公开（公告）日： | 2013-12-04 |
| 发明（设计）人： | 苏华荔;王安如 | 申请（专利权）人： | 北京大北农科技集团股份有限公司;浙江大北农农牧科技有限公司;漳州大北农农牧科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N1/28 | 分类号： | G01N1/28;G01N15/14 |
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| 地址： | 100080 北京市海*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 猪外周血 脾脏 淋巴 细胞膜 表面 分子 样品 制备 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种适用于流式细胞术检测猪外周血和脾脏淋巴细胞膜表面分子的样品制备试剂盒，包括缓冲液I、缓冲液II和缓冲液III，所述缓冲液I为含100-800U/ml青霉素，100-800μg/ml链霉素，1-8μg/ml两性霉素B的PBS缓冲液，pH值为7.2-7.4；所述缓冲液II为含2mMEDTA,0.2%-0.6%BSA，100-800U/ml青霉素，100-800μg/ml链霉素，1-8μg/ml两性霉素B的PBS缓冲液，pH值为7.2-7.4；所述缓冲液III为含0.1%NaN3，1%-5%多聚甲醛的PBS缓冲液，pH值为7.2-7.4。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液I为含500U/ml青霉素，5μg/ml链霉素，5μg/ml两性霉素B的PBS缓冲液，pH值为7.2-7.4；所述缓冲液II为含2mM EDTA,0.5%BSA，500U/ml青霉素，500μg/ml链霉素，5μg/ml两性霉素B的PBS缓冲液，pH值为7.2-7.4；所述缓冲液III为含0.1%NaN3，2%多聚甲醛的PBS缓冲液，pH值为7.2-7.4。
3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，还包括红细胞裂解液，所述红细胞裂解液主要成分为：0.16M NH4Cl，0.13mMEDTA，12mM NaHCO3，pH值为7.2。
4.一种利用权利要求1～3任一项所述的试剂盒进行猪外周血和脾脏淋巴细胞膜表面抗原流式细胞术检测的样品制备方法，其包括采集猪外周血和猪脾脏组织，制备淋巴细胞单细胞悬液，裂解红细胞后用抗体染色进行固定，直至用流式细胞仪进行检测。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于：将猪的外周血或脾脏获取生物样品并制成细胞粗提混悬液；将粗提液转入离心管后，加入红细胞裂解液经冰浴裂解红细胞，离心除去上清，收集沉淀细胞；用缓冲液I重悬细胞，并计数细胞；用缓冲液II重悬细胞，并加入荧光素标记的细胞膜表面抗体，冰浴30min；再用缓冲液I洗涤细胞后，将细胞悬浮于缓冲液III，以备流式细胞仪的检测。
6.权利要求1～3任一项所述的试剂盒在细胞表面分子检测中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的细胞表面分子选自CD3，CD4，CD8，CD25和/或CD69。
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