[发明专利]黄素腺嘌呤双核苷酸结合型葡萄糖脱氢酶

说明书

本申请为专利申请200780019640.5（申请日：2007年5月25日，发明创造名称：黄素腺嘌呤双核苷酸结合型葡萄糖脱氢酶）的分案申请。

技术领域

本发明涉及辅酶结合型葡萄糖脱氢酶及其用途。本发明具体涉及以黄素腺嘌呤双核苷酸作为辅酶的葡萄糖脱氢酶，以及该酶的生产菌、该酶的制造方法、使用该酶的葡萄糖测定法等。

背景技术

近年来，广泛应用的是采用电化学生物传感器的简易型自我血糖测定器。生物传感器是在绝缘性的基板上形成电极、酶反应层而形成的。作为其中可以使用的酶，可以例举葡萄糖脱氢酶(GDH)、葡萄糖氧化酶(GO)等。现已指出使用GO的方法容易受到测定试样中所溶解氧的影响，溶解氧对测定结果产生影响这样的问题。

另一方面，作为不受溶解氧影响且在不存在NAD(P)下作用于葡萄糖的酶，已知有以吡咯喹啉醌(PQQ)作为辅酶的GDH(PQQ-GDH)(例如，参照专利文献1-3)。但是，PQQ-GDH中却存在着如下问题：(1)PQQ容易被酶解离，(2)对葡萄糖选择性低，以及(3)由于一般存在于膜馏分中因此其提取·分离操作有困难等。

可是，近年来报道了，在医院使用简易血糖自我测定器的患者中发生低血糖等的病例。随后的调查分析的结果是，PQQ-GDH与作为输液成分而含有的麦芽糖反应，显示出比实际血糖值更高的值，从而清楚了其是这种发病例的原因(医药品·医药用具等安全性情报206号(Pharmaceuticals and Medical Devices Safety Information No.206)，平成16年(2004年)10月，厚生劳动省医药食品局)。由于有这样的事情，而迫切希望开发特异性作用于葡萄糖，尤其是与麦芽糖的作用性低的血糖测定用酶。

而且，除了PQQ-GDH之外，作为不受溶存氧的影响且在不存在NAD(P)下与葡萄糖作用的酶，已知有以黄素腺嘌呤双核苷酸作为辅酶的葡萄糖脱氢酶(本说明书中也称为“FAD-GDH”)。迄今为止分别从米曲霉(Aspergillus oryzae)(非专利文献1～4)和土曲霉(Aspergillus terreus)(专利文献4)中获得了FAD-GDH。

专利文献1：特开2000-350588号公报

专利文献2：特开2001-197888号公报

专利文献3：特开2001-346587号公报

专利文献4：国际公开第2004/058958号小册子

非专利文献1：Studies on the glucose dehydrogenase of Aspergillus oryzae.I.Induction of its synthesis by p-benzoquinone and hydroquinone,T.C.Bak,and R.Sato,Biochim.Biophys.Acta,139,265-276(1967).

非专利文献2：Studies on the glucose dehydrogenase of Aspergillus oryzae.II.Purification and physical and chemical properties,T.C.Bak,Biochim.Biophys.Acta,139,277-293(1967).

非专利文献3：Studies on the glucose dehydrogenase of Aspergillus oryzae.III.General enzymatic properties,T.C.Bak,Biochim.Biophys.Acta,146,317-327(1967).

非专利文献4：Studies on the glucose dehydrogenase of Aspergillus oryzae.IV.Histidyl residue as an active site,T.C.Bak,and R.Sato,Biochim.Biophys.Acta,146,328-335(1967).

发明内容

本发明是在上述背景下以提供可以更正确地测定葡萄糖量的新酶及其生产菌以及其用途作为课题。