[发明专利]一株杂交瘤细胞及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株杂交瘤细胞及其应用。

背景技术

帕金森氏病(PD)是临床上最常见的神经系统退行性疾病之一，我国的PD患者人数超过百万。随着社会的老龄化，该病的发病人数呈逐年增多趋势，严重地影响着老龄人口的生存质量，给家庭和社会带来沉重负担。该病病因不清，临床上尚无有效的治愈方法。它的主要病理特征是多巴胺能神经元进行性、选择性缺失和路易小体(Lewy小体)的形成。目前已有研究证明，路易体的主要构成成分是纤维化聚集的α-突触核蛋白（α-SYN），且其中90%以上以磷酸化的形式存在，明显高于正常人4%的水平。

α-突触核蛋白是一种由126个氨基酸组成的相对分子质量18000-20000蛋白质，由4号染色体上的单基因编码，由7个外显子组成。该蛋白存在于神经元，尤其是突触前末梢。α-突触核蛋白在全身各组织和器官中均有表达。在脑内，主要存在于新皮质，海马和黑质。正常时α-突触核蛋白是一种天然不折叠并可溶的蛋白质，其易发生自身异常聚集。若聚集过度，超过细胞自身蛋白酶的抗聚集能力，将最终形成Lewy小体及Lewy轴突。线粒体复合物I的功能紊乱、氧化应激及蛋白过量表达等刺激因素都会促进α-突触核蛋白堆积。α-突触核蛋白的不溶性的异常堆积和其不能正常的被降解都会导致神经性退化，最终导致神经元死亡和神经功能障碍，从而诱发PD。

2000年首次报道了Lewy体中的α-突触核蛋白129位点丝氨酸可被casein kinase（CK1）、CK2和G蛋白偶联受体激酶(Gprk)磷酸化。之后有文献报道在包括PD的α-突触核蛋白相关退行性病变中，α-突触核蛋白129位点的丝氨酸均呈选择性高度磷酸化水平状态，远远超过在正常生理情况下该蛋白的磷酸化水平。通过双向电泳、质谱等技术也同样证实在帕金森患者路易氏体中α-突触核蛋白处于高度磷酸化修饰，修饰位点仅为C端129位的丝氨酸。以上均提示α-突触核蛋白129位丝氨酸的磷酸化修饰在PD的发病过程中可能具有重要的作用，所以近年来α-突触核蛋白129位点丝氨酸的磷酸化如何参与PD的发病机制逐渐受到人们的关注。

发明内容

本发明的目的是提供一株杂交瘤细胞及其应用。

本发明提供的杂交瘤细胞（3H4）pS129syn（3H4），简称杂交瘤细胞pS129syn（3H4），已于2012年6月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏号为CGMCC No.6178。

本发明还保护所述杂交瘤细胞pS129syn（3H4）分泌的单克隆抗体。

本发明还保护所述单克隆抗体在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的功能为检测磷酸化的α-SYN蛋白。

所述α-SYN蛋白可为如下（a）或（b）：

（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（b）将序列1的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且由序列1衍生的蛋白质。

本发明还保护所述单克隆抗体在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的功能为辅助鉴定帕金森病患者。

本发明还保护一种用于检测磷酸化的α-SYN蛋白的试剂盒，包括所述单克隆抗体。

所述α-SYN蛋白可为如下（a）或（b）：

（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（b）将序列1的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且由序列1衍生的蛋白质。

本发明还保护用于辅助鉴定帕金森病患者的试剂盒，包括所述单克隆抗体。

由于帕金森病确切病因复杂，尚不十分清楚，缺乏有效的预防和治疗措施。而且，目前国际上还没有关于PD早期诊断的报道，更不用谈早期诊断的方法了，当PD患者有明显的临床表现时，其中脑黑质多巴胺能神经元已经有较多缺失，所以继续在发病早期找到一种biomarker，早期发现处于PD潜伏期的尚未出现PD临床症状的患者，以便对于PD能够进行早期干预，提高患者的生活质量。

目前市售磷酸化α-SYN抗体较少，而且特异性不强，本发明提供的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体针对丝氨酸129位磷酸化的α-SYN具有较强的特异性，可用于检测磷酸化α-SYN蛋白在大鼠脑中的表达、在人脑中的表达等。因此本发明提供的单克隆抗体可以用于制备试剂盒，用来诊断帕金森病。

附图说明

图1为实施例1中五只小鼠强化免疫后OD值比值（加血清组/PBS组）结果。

图2为实施例4的结果。

图3为实施例5的结果。