[发明专利]一种定量检测牛奶中β-内酰胺酶残留的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于食品检测领域，具体涉及定量检测牛奶中β-内酰胺酶残留的试剂盒。

背景技术

β-内酰胺酶是一种近年来才开始引起大家关注的食品添加剂，主要添加在牛奶中以生产无抗奶（指用不含抗生素的原料生产出来的牛奶）。β-内酰胺酶作为牛奶中抗生素分解剂（解抗剂），最初是科研人员作为一项科研成果推出的。这种做法可有效分解牛奶中残留的β-内酰胺类抗生素。但是应用β-内酰胺酶分解牛奶中抗生素的风险在于：（1）人体大量摄入β-内酰胺酶可能会导致人体产生细菌耐药性，因此行政主管部门已经明令禁止在生鲜乳中添加；（2）在分解β-内酰胺药物后，可能引进其他有害物质（青霉素噻唑酸等）；（3）解抗剂的添加纵容了奶牛饲养过程中抗生素的滥用。

正因为如此，卫生部于2009年2月正式公布了《食品中可能违法添加的非食用物质名单（第二批）》，其中明确认定β－内酰胺酶是属于违法添加的非食用物质，其作用就是掩蔽抗生素。

虽然卫生部已经明文规定β-内酰胺酶属于不安全食品添加剂，但是，由于细菌耐药产生的内源性β-内酰胺酶有300多种，且内源性、外源性β-内酰胺酶的区别鉴定检测技术尚未见报道。而目前各检测机构正在研究的生鲜牛乳中β-内酰胺酶的检测方法无论是仪器分析、色谱法、配体-受体法还是微生物法，都存在一个不确定因素，即：测出的β-内酰胺酶无法判定是人为添加（外源性）的或是耐药细菌产生（内源性）的。也就是说，乳制品中检出的β-内酰胺酶有可能是非法添加的，也有可能是细菌产生的。在尚未制定β-内酰胺酶残留限量标准的前提下，获得完整的定量检测数据将是监督部门制定限量标准的重要依据。因此β-内酰胺酶定量检测方法的研究应运而生。

生鲜牛乳中的β-内酰胺酶残留检测从方法学上可以分为以下两种：1）通过测定未分解的酶促反应底物（青霉素）的含量来间接推算体系中β-内酰胺酶的浓度。该方法以生物测定法（杯碟法）及配体-受体检测法为代表，其特点是原理明确、特异性强。2）通过测定底物青霉素分解产物的方法，青霉素经过β-内酰胺酶的分解之后生成稳定的中间产物—青霉噻唑酸，通过测定体系中青霉噻唑酸的含量将能够计算出β-内酰胺酶的含量。该方法以碘量法、产色头孢菌素法为代表。

但是，上述两类检测方法都存在一定的缺陷。无论上述哪一种方法都还不能做到定量化，而测定未分解的酶促反应底物的方法又存在时间长、成本高的缺陷。同时，β-内酰胺酶作为一类小分子的蛋白（29kDa～39kDa）混在大量的蛋白、氨基酸乳浊液（牛奶）中，如果缺乏有效的检测手段则很难将其特异性分离。因此，找到一种既能精确定量又能快速、高通量地检测出β-内酰胺酶残留的方法势在必行。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种定量检测生鲜牛乳中β-内酰胺酶残留的试剂盒，能快速、高通量地检测出β-内酰胺酶残留量。

为此，本发明公开了一种定量检测牛奶中β-内酰胺酶残留的试剂盒，其特征在于所述试剂盒包含包被有青霉素结合蛋白的酶标板、标记物偶联β-内酰胺类抗生素、底物对照1为β-内酰胺类抗生素浓度为0ppb的脱脂奶粉冻干品、底物对照2为含标定浓度β-内酰胺类抗生素的脱脂奶粉冻干品、β-内酰胺类抗生素标准品。

本发明的定量检测生鲜牛乳中β-内酰胺酶残留试剂盒，利用β-内酰胺酶可分解牛奶样品中β-内酰胺类抗生素的原理，通过测定与β-内酰胺酶反应后剩余的β-内酰胺类抗生素的含量来检测牛奶中残留的β-内酰胺酶。

在一些实施例中，所述青霉素结合蛋白为重组青霉素结合蛋白PBP2x或PBP3；

在一些实施例中，所述标记物为本领域所常见的检测标记物，包括但不限于酶、核素、量子点、荧光素、胶体金或荧光微球中之一；

在一些实施例中，所述酶为辣根过氧化物酶、β-D-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶或6-磷酸葡糖脱氢酶中之一。

在一些实施例中，所述核素为³H、¹⁸⁸Re或¹³¹I中之一。

在一些实施例中，所述荧光素为异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明或3价镧系螯合物中之一。

在一些实施例中，所述荧光微球为时间分辨荧光微球，其制备参考中国专利ZL03819391.4。

在一些实施例中，所述β-内酰胺类抗生素为青霉素类抗生素、头孢类抗生素、或碳青霉烯类抗生素，其中优选为阿莫西林或氨苄西林。