[发明专利]一种节水抗旱稻花药的培养方法

权利要求书

1.一种节水抗旱稻花药的培养方法,其步骤包括外植体的选择,外植体的消毒与接种,愈伤组织诱导与增殖,愈伤组织分化，组培苗生根培养与移栽，其特征在于，所述花药愈伤组织诱导的培养基配方为M8基本培养基 + 2,4-D 2.0mg·L^-1 + NAA 3.0mg·L^-1 + KT 1 mg·L^-1，附加水解酪蛋白300 mg·L^-1，脯氨酸300 mg· L^-1，谷氨酰胺500 mg·L^-1，麦芽糖55g·L^-1，植物凝胶（phytagel） 3.8g·L^-1，pH为6.0。

2.根据权利要求1所述的节水抗旱稻花药的培养方法，其特征在于，所述花药愈伤组织分化培养基配方为MS基本培养基 + 6-BA 2.0 mg·L^-1 + KT 2.0 mg·L^-1 + IAA 0.2 mg·L^-1 + NAA 0.2 mg·L^-1,附加山梨醇10g·L^-1，水解酪蛋白1.0g·L^-1,麦芽糖30g L^-1, 植物凝胶（phytagel） 3.8g·L^-1，pH为6.0。

3.根据权利要求1所述的节水抗旱稻花药的培养方法，其特征在于，所述组培苗生根培养与移栽培养基配方为1/2MS + 0.1NAA mg·L^-1，蔗糖20g·L^-1，植物凝胶（phytagel）3.8g·L^-1，pH为6.0，生根培养条件为光照强度5000-6000Lux,光照周期为12h/d，培养温度为25℃。

4.根据权利要求1所述的节水抗旱稻花药的培养方法，其特征在于，所述外植体选取花粉发育时期为单核中期到晚期的水稻幼穗。

5.根据权利要求1或4所述的节水抗旱稻花药的培养方法，其特征在于，所述外植体的消毒与接种的方法是对选取的幼穗用70%酒精棉球简单擦拭灭菌后，保湿包好，进行低温预处理，然后剥去叶鞘，挑选幼穗花药处于单核靠边期的枝梗，剪成5-7cm的小段，用次氯酸钠和双氧水灭菌处理，然后用剪颖倒花药法接入愈伤诱导培养基，进行热激处理。

6.根据权利要求5所述的节水抗旱稻花药的培养方法，其特征在于，所述热激处理方法为将刚接种好的愈伤转到30-32℃暗培养箱，热激处理24小时，以提高出愈率。

7.根据权利要求5所述的节水抗旱稻花药的培养方法，其特征在于，所述低温预处理的方法为将花粉发育时期为单核中期到晚期的幼穗，用70%酒精棉球擦拭叶片和叶鞘，保留前1-2张叶片，然后用潮湿的纱布和塑料薄膜依次包好，包好的幼穗放在7-9℃冰箱中低温处理7-9天。

8.根据权利要求5所述的节水抗旱稻花药的培养方法，其特征在于，所述外植体的消毒是将枝梗剪为5-7厘米的小段，用70%酒精浸泡30-60秒进行表面消毒，再依次用新鲜配制的1-1.5％次氯酸钠灭菌20min，3％双氧水灭菌10min，期间上下倒置振荡灭菌瓶几次，最后无菌水冲洗4－5次。

9.根据权利要求1所述的节水抗旱稻花药的培养方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导是在培养温度为25℃、光照强度为3000-4000lux,光照周期为12h/d的条件下半光倒扣培养15-20天，至花药愈伤开始长出后，再转到25℃条件下继续暗培养10-15天。

10.根据权利要求1所述的节水抗旱稻花药的培养方法，其特征在于，所述愈伤组织分化是在光照培养温度为25℃，光照强度5000-6000lux,光照周期为14h/d，光照培养时间30-40天，直至长出小苗。