[发明专利]提高截短侧耳素产量的方法

说明书

技术领域

本领域涉及生物技术领域，具体地，涉及了一种提高截短侧耳素(Pleuromutilin)产量的方法。

背景技术

截短侧耳素是化学合成泰妙菌素(Tiamulin)的前体，分子式为C₂₂H₃₄O₅，分子量为378.51，属二萜类化合物，是高等真菌担子菌侧耳属(Pleurotus mutilus)或其它真菌的次级代谢产物，是一种天然的具有广泛抗菌活性的二萜类化合物。

虽然我国截短侧耳素的产能大，虽然本领域已经有利用不同的生物体来生产截短侧耳素的技术，然而生产菌株的效价水平较低，增加了生产的成本。这大大限制了截短侧耳素的应用。

综上所述，本领域迫切需要开发有效的提高截短侧耳素产量的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种有效的提高截短侧耳素产量的方法。

本发明提供了通过辅酶因子再生从而提高截短侧耳素产量的方法。

在本发明的第一方面提供了一种双酶偶联的构建物，所述构建物包括：

(a)用于生产外源酮基还原酶(KR)的第一亚构建物，

其中所述的第一亚构建物包括第一启动子、与所述第一启动子可操作地连接的酮基还原酶的编码序列、和终止密码子；

(b)用于生产外源葡萄糖脱氢酶(GDH)的第二亚构建物，

其中所述的第二亚构建物包括第二启动子、与所述第二启动子可操作地连接的酮基还原酶的编码序列、和终止密码子，

其中所述的第一亚构建物和第二亚构建物是相互独立的、或是一体的。

在另一优选例中，所述的酮基还原酶(KR)来源于来源于酿酒酵母、黑曲霉、紫杉、双孢蘑菇、或肠膜明串珠菌。

更佳地，所述的酮基还原酶选自下组：

来源于酿酒酵母的HMGR(Y)；

来源于黑曲霉的HMGR(A)；

来源于紫杉的HMGR(T)；

来源于双孢蘑菇的HMGR(B)；

来源于肠膜明串珠菌亚种J18(Leuconostoc mesenteroides subsp.mesenteroides Strain J18)的HMGR(L)。

在另一优选例中，所述的葡萄糖脱氢酶(GDH)来源于枯草芽孢杆菌、巨大枯草芽孢杆菌的葡萄糖脱氢酶、酿酒酵母、黑曲霉、紫杉。

更佳地，所述的葡萄糖脱氢酶(GDH)选自下组：

来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的葡萄糖脱氢酶(Glucose Dehydrogenase GDH(B))；

来源于巨大枯草芽孢杆菌的葡萄糖脱氢酶(Glucose Dehydrogenase GDH(M))；

来源于酿酒酵母的葡萄糖脱氢酶(Glucose Dehydrogenase GDH(Y))；

来源于黑曲霉的葡萄糖脱氢酶(Glucose Dehydrogenase GDH(A)；

来源于紫杉的葡萄糖脱氢酶(Glucose Dehydrogenase GDH(T)。

在另一优选例中，所述的酮基还原酶(KR)和葡萄糖脱氢酶(GDH)选自下列组合：

来源于酿酒酵母的HMGR(Y)与来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的葡萄糖脱氢酶(Glucose Dehydrogenase GDH(B))组合成的HMGR(Y)-GDH(B)偶联组合；

来源于黑曲霉的HMGR(A)与来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的葡萄糖脱氢酶(Glucose Dehydrogenase GDH(B))组合成的HMGR(A)-GDH(B)偶联组合；

来源于紫杉的HMGR(T)与来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的葡萄糖脱氢酶(Glucose Dehydrogenase GDH(B))组合成的HMGR(T)-GDH(B)偶联组合；

来源于双孢蘑菇的HMGR(B)与来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的葡萄糖脱氢酶(Glucose Dehydrogenase GDH(B))组合成的HMGR(B)-GDH(B)偶联组合；