[发明专利]一种乳清蛋白膜及其制备方法

权利要求书

1.一种乳清蛋白膜的制备方法，其特征在于通过在纯水中加入乳清蛋白、甘油制得成膜液，成膜液于45-50℃水浴加热0.5-2h，冷却至20-25℃后，加入重组脂肪氧合酶及亚油酸，超声脱气后,倒入铺有塑封膜的玻璃培养皿中，20-25℃反应2-3h，50-55℃干燥36-48h揭膜。

2.根据权利要求1所述的乳清蛋白膜的制备方法，其特征在于成膜液中乳清蛋白的质量百分含量为8%-12%，甘油与乳清蛋白质量比例为1:4-1:5，重组脂肪氧合酶添加量为90U/g-110U/g成膜液，亚油酸浓度为0.8μmol/g-1.2μmol/g成膜液，成膜液pH为5.5-6.5。

3.根据权利要求2所述的乳清蛋白膜的制备方法，其特征在于所述的成膜液中乳清蛋白的质量百分含量为10%，甘油与乳清蛋白比例为1:4，脂肪氧合酶酶量为100U/g成膜液，亚油酸浓度为1.0mmol/g成膜液，成膜液pH为6.0。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的乳清蛋白膜的制备方法，其特征在于所述的脂肪氧合酶为重组鱼腥藻脂肪氧合酶，该重组鱼腥藻脂肪氧合酶通过如下方法制备：

（1）以鱼腥藻基因组DNA为模板，序列为SEQ ID NO.5的ana-Lox-F和序列为SEQ ID NO.6的ana-Lox-R为引物合成含有SacI和XhoI酶切位点的脂肪氧合酶基因序列；

（2）将上一步纯化的PCR产物经SacI、XhoI双酶切后插入载体pET-23a的SacI/XhoI酶切位点之间，获得含有ana-Lox基因的表达质粒pET-23a-ana-Lox；

（3）将含有ana-Lox表达质粒pET-23a-ana-Lox转化大肠杆菌表达宿主菌株BL21(DE3)pLysS，在37℃培养10-11小时后挑取小菌落,接入含有氨苄青霉素的50ml LB液体培养基，70-90rpm30℃培养过夜,按照1:40的体积比取种子液加入到含有氨苄青霉素的100mlLB液体培养基,35℃180rpm振荡2-3小时至OD600约为0.6时加IPTG 100μg/ml诱导，5小时后离心收集菌体；

（4）将诱导表达收集到的菌体，用磷酸缓冲液重悬菌体，超声波破碎菌体，4℃，10000×g离心10min，收集上清液作为粗酶液，将处理得到的粗酶液按照Ni-NTA His Tag Kit说明书进行纯化。

5.权利要求1～3中任一项所述的制备方法制备的乳清蛋白膜。