[发明专利]一种奉节脐橙真伪鉴定与品质评价的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种甜橙品种的指纹图谱，特别涉及一种奉节脐橙真伪鉴定与品质评价的方法。 

背景技术

柑橘是世界第一大果树作物，中国柑橘栽培面积与产量居世界之首，但地方名优特色品种较少。奉节脐橙(Citrus sinensis Osbeck)为重庆奉节华盛顿脐橙芽变优株，是我国优质甜橙地方名品之一。近年随着中国柑橘栽培面积的扩大，奉节脐橙受周边产区伪冒果品冲击影响严重。为保护“奉节脐橙”品牌，奉节县进行了“奉节脐橙”地理标志产品保护认证，对奉节县草堂镇、白帝镇、汾河镇等20个乡镇现辖行政区域生产的脐橙予以地理标志产品保护，但产地认证仍无法鉴定市场流通中的伪冒果品。此外，人们也试图根据果形指数及口感特征对奉节脐橙进行鉴定，但其指标无法量化、人为因素大，难以有效的进行定性判断。因此以其自身品质特征为基础，建立有效的真伪鉴定与品质评价方法，是保护地方优质甜橙品牌的唯一途径与出路。 

甜橙果实营养丰富，富含黄酮类、柠檬苦素类、氨基酸、维生素及微量元素等多种成分，其中黄酮是甜橙果实中最重要的一类活性成分。近年来人们对柑橘果实黄酮类组分开展了广泛研究，目前已从不同品种柑橘果实中分离鉴定出60多种活性黄酮单体，同时人们也对不同柑橘品种间与相同品种不同产地间的样品黄酮进行了对照与检测，结果表明不同柑橘品种间以及相同品种在不同气候条件下，柑橘果实黄酮类成分的组成、相对含量及生物活性均具有明显差异。因此，根据不同品种或不同气候条件下果实黄酮类特征性成分的组成与相 对含量差异进行柑橘品种鉴定与品质评价具有可操作性。 

色谱指纹图谱是指供试样本经色谱分析技术得到的反映供试品各组分群体特征的图谱，目前色谱指纹图谱检测技术已成为国际公认的控制中药和天然药物质量的有效手段，现已广泛应用于中药材、植物提取物与中药注射剂的全程质量监控，此外化学成分色谱指纹图谱也用于对茶叶、葡萄酒以及烟草等多种农产品的品质监测，但将该技术应用于地方柑橘优良品种质量控制的研究尚未报道。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种奉节脐橙真伪鉴定与品质评价的方法，本方法能够建立奉节脐橙果实的色谱指纹图谱，进而可实现对其真伪的鉴定与品质的评价。 

本发明的目的是这样实现的： 

一种奉节脐橙真伪鉴定与品质评价的方法，其特征在于，它是按照以下步骤进行的： 

（1）取样：样品分别来自奉节脐橙地理标志产品保护区20个乡镇中的至少10个产区，于成熟期，选生长势中等、生态条件和树形基本一致的枳砧奉园72-1芽接五龄成年植株随机采样；每样选5株，每株自树冠中部外围随机采集成熟果实5枚，按产地分类混合后于-4℃低温贮存； 

（2）供试品溶液制备：各类试样随机选取各3个，剥取果皮和囊瓣，45℃烘至恒重，分别取试样果皮及果肉囊瓣干样，粉碎10min，过80目筛，得供试样粉；精确称取0.2g样粉，加入甲醇20mL后，240W超声处理30min，收集上清液后再加20mL甲醇240W超声处理30min，合并上清液，于5000r/min离心10min，减压回收溶剂，甲醇定容至10mL，0.22μm微孔滤膜过滤，得 供试品溶液； 

（3）HPLC分析：采用岛津SIL-20A自动进样器精密吸取10μL供试品溶液自动进样，后采用岛津LC-20AD型HPLC仪检测，色谱条件如下：色谱柱为迪马Diamonsil C18柱，规格为250mm×4.6mm，5μm；流动相为乙腈-0.2%乙酸水溶液流动系统；流速1mL·min^-1，DAD检测器290nm检测，检测时间为35min，柱温箱为30℃；利用夹角余弦法进行各色谱图之间相似度计算，同时利用国家药典委中药色谱指纹图谱相似度评价软件对供试品溶液HPLC检测数据经LC-solution色谱工作站导出AIA（*.cdf）格式文件进行共有成分峰匹配、对照谱图生成及相似度计算，分别建立奉节脐橙果皮与果肉中的黄酮类成分共有特征性HPLC色谱指纹图谱； 

（4）真伪鉴定与品质评价：以已构建的奉节脐橙果皮与果肉中的黄酮类成分共有特征性HPLC色谱指纹图谱为参照，随机抽取市售品种的脐橙，利用步骤（2）中所述的供试品溶液制备方法和步骤（3）中所述的HPLC检测方法，处理随机抽取的市售品种的脐橙，并对其果皮与果肉的色谱数据进行相似度分析，即可实现对该随机抽取市售品种的脐橙进行真伪鉴定与品质评价。