[发明专利]一种反刍动物线虫寄生阶段幼虫的分离装置及分离方法

说明书

技术领域

本发明属于线虫寄生阶段幼虫研究技术领域，尤其涉及一种反刍动物线虫寄生阶段幼虫的分离装置及分离方法。

背景技术

线虫病是反刍动物的常见病之一，尤其放牧家畜和野生草食动物最为常见多发，其病原种类多，分布广，感染率高，感染强度大，危害严重，直接影响家畜成活率和生产性能，使增重减慢，产肉、产毛量降低，常在春季出现成虫寄生高潮而引起虫性下痢、瘦弱死亡，给草原畜牧业经济造成了巨大的损失。

线虫的绝大部分为土源性线虫，其完成一个发育世代需要经过成虫、虫卵、自由生活阶段幼虫(包括第一、二、三期幼虫)、寄生阶段幼虫(包括第四、五期幼虫)等几个发育期。迄今，对成虫、虫卵的检查方法较为成熟，多采用寄生虫学完全剖检法检查成虫和粪便虫卵检查法检查虫卵及粪便中的第一期幼虫；但对处于寄生阶段的第四、五期幼虫的分离方法及鉴定技术研究不够深入，致使对线虫病病原生物学特性、流行病学研究，防治药物效果评价与防制技术研究等长期停滞在成虫、虫卵水平上，而不能对线虫寄生阶段幼虫进行有效的研究。对线虫寄生阶段幼虫的分离方法在国内研究者中尚存在多种不同意见，而线虫寄生阶段幼虫的数量统计对研究以上问题占有决定性的意义，并且评价抗蠕虫药的驱虫效果，也要检查药物对亲组织期幼虫的作用。因此，试验选择出一种较好的线虫寄生阶段幼虫分离装置和分离方法，在科研、生产上有着重要的价值。

线虫寄生阶段幼虫的分离培养涉及多种因子，包括培养分离液的浓度、温度的选择、培养时间及分离装置等，以下几方面是直接影响分离成本、幼虫检出率、幼虫清洁度和方法的稳定性及适用性的主要因素。(1)培养分离液的浓度直接影响寄生虫的形态的完整性、稳定性和保存时间。在分离、保存过程中，对线虫寄生阶段幼虫的表皮而言，培养分离液是一种新的外部环境，其浓度过高，则对寄生虫的表皮形成一种高渗环境，导致虫体表皮的骤然脱水皱缩，使虫体内压力迅速升高，引起崩解；其浓度过低，则导致虫体膨胀、裂解。常规用于培养、保存线虫成虫的氯化钠溶液浓度为0.9％的生理盐水或更高，而对线虫幼虫使用该浓度的氯化钠溶液存在虫体变形、崩解等问题。(2)培养温度也是影响线虫寄生阶段幼虫分离培养的一个重要因素，温度过低，则幼虫活动性不强，导致幼虫分离率降低，分离时间变长，温度过高，易使幼虫死亡崩解。(3)培养时间也是影响线虫寄生阶段幼虫分离培养的一个重要因素，时间过短，易使幼虫分离率降低、分离幼虫总量变少；分离时间过长，易使幼虫腐烂变质，亦使分离幼虫成本增加。(4)分离装置是影响线虫寄生阶段幼虫分离培养的一个关键因素，其直接影响幼虫检出率、幼虫清洁度和分离成本等。

通常线虫寄生阶段幼虫的分离方法有与其配套的分离装置，常用的分离方法主要有贝尔曼氏法、胃酶消化向热法和琼脂向热法等，在应用贝尔曼氏法检查时，必须使用贝尔曼氏装置，其主要由普通玻璃漏斗、胶皮管、小试管等连接而成；胃酶消化向热法的装置主要由漏斗、粗纱网、细玻璃珠、玻璃棉等组成的类似贝尔曼氏法装置构成；琼脂向热法的装置主要由培养皿、琼脂纱布网、滤纸条等构成，这些方法及其装置在实际应用中各有利弊，如贝尔曼氏法由于普通玻璃漏斗(直径10cm)和小试管(长2cm)小，所盛装的水和粪便样品量少，进而所收集的线虫寄生阶段幼虫数量也就少，导致幼虫检出率低，灵敏性较差，仅能检查粪便中的肺线虫1期幼虫；胃酶消化向热法及其装置不能用于对胃肠内容物材料的检查，其检出效率低，镜检不够方便；琼脂向热法及其装置对幼虫的检出效率较低，其分离装置复杂，检查时间长。

发明内容

本发明的目的在于提供一种反刍动物线虫寄生阶段幼虫的分离装置及分离方法，旨在解决现有线虫幼虫分离方法易使幼虫崩解、检出率低、清洁度不高等问题，解决现有的贝尔曼氏法由于普通玻璃漏斗和小试管小，所盛装的水和粪便样品量少，进而所收集的线虫寄生阶段幼虫数量也就少，导致幼虫检出率低，灵敏性较差，仅能检查肺线虫1期幼虫；胃酶消化向热法及其装置不能用于对胃肠内容物材料的检查，其检出效率低，镜检不够方便；琼脂向热法及其装置对幼虫的检出效率较低，其分离装置复杂，检查时间长的问题。

本发明是这样实现的，一种反刍动物线虫寄生阶段幼虫的分离装置，所述反刍动物线虫寄生阶段幼虫的分离装置包括：培养皿、四耳防锈金属圈、纱布网；

所述四耳防锈金属圈设置在所述培养皿上，所述纱布固定在所述四耳防锈金属圈上。

进一步，所述纱布通过棉线缝制固定在四耳防锈金属圈上。

进一步，所述四耳防锈金属圈通过四耳托架于培养皿上。