[发明专利]一种日沟维肠杆菌及其在麻疯树饼粕发酵脱毒中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株日沟维肠杆菌及其在麻疯树饼粕发酵脱毒中的应用，属于发酵领域。 

背景技术

麻疯树(Jatropha curcas L.)是世界公认的最有可能成为未来替代化石能源的具有巨大开发潜力的树种，利用麻疯树油加工生产的生物柴油在各项性能指标上接近甚至超过国家“0”号柴油以及国家生物柴油标准，因此以麻疯树果生产生物柴油已经成为现在研究生产生物柴油的一个活跃方向。麻疯树饼粕（Jatropha curcas seed cake，JCSC）是生物柴油生产过程中的副产物，具有很高的蛋白含量和较高的营养价值，但是因其毒性大，主要被作为肥料用或直接排放于自然环境中，不但严重地浪费了大量的优质蛋白资源，而且还造成了严重的环境污染，若能降低其毒性，则可作为饲用蛋白使用。 

麻疯树饼粕的主要毒性物质是佛波酯及其衍生物、胰蛋白酶抑制剂和Curcin。其中，胰蛋白酶抑制剂和Curcin是热不稳定性成分，简单的加热处理就可以使它们的分子构型发生变化，从而失去活性通过热处理可以使其大量减少，至几乎完全消失。但是，佛波酯(Phorbol-ester,PE)为热稳定性成分，毒性强，可以在160℃下耐受30min而不受影响，其结构属于四环二萜型，巴豆烷是佛波醇酯的基本结构部分，因此，脱除佛波酯的是麻疯树饼粕利用的关键因素。 

目前，国内外多采用物理化学方法除去麻疯树油粕中的佛波酯，但是化学脱毒操作复杂过程繁琐、易导致化学物残留，而且脱毒范围小、成本高；而酶解只能降解某种毒素，针对性较强，钝化效果不一致；物理脱毒效率低，且对饼粕中的营养成分造成一定的破坏。 

微生物具有繁殖快、数量大、产酶系复杂等特点，利用微生物发酵工程技术脱毒是一种较为有效的方法，文献报道采用铜绿假单胞菌（P.aeruginosa PseA）发酵能够降解麻疯树籽粕中的佛波酯。但是，铜绿假单胞菌是医院内感染的主要病原菌之一，经常引起术后伤口感染，也可引起褥疮、脓肿、化脓性中耳炎等，还是尿路感染的常见病原菌。因而用铜绿假单胞菌处理的麻疯树饼粕作为饲料使用，存在潜在的安全隐患。 

发明内容

本发明提供了一种新的日沟维肠杆菌及其在麻疯树饼粕发酵脱毒中的应用。 

日沟维肠杆菌，其标准菌株为日沟维肠杆菌Enterobacter gergoviae Brenner et al.，保藏号为ATCC33028，分离自化妆品中，通常用于化妆品中抗菌防腐剂含量的检测，极少引起人体或动物体发病。 

本发明日沟维肠杆菌，它是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号：CCTCC NO:M2013184的日沟维肠杆菌Enterobacter gergoviae zxy-15。 

本发明还提供了日沟维肠杆菌在麻疯树饼粕的发酵脱毒中的用途。 

其中，所述日沟维肠杆菌是保藏号：CCTCC NO:M2013184的日沟维肠杆菌Enterobacter gergoviae zxy-15。 

本发明麻疯树饼粕的发酵脱毒方法，包括如下步骤： 

（1）取日沟维肠杆菌，复苏制备种子液； 

（2）取麻疯树饼粕，加水混匀，接种步骤（1）制备的种子液，其中，料水比为1：0.8～1.2（w/v），种子液的接种量为麻疯树饼粕的10～30%（v/w）； 

（3）在温度为30～37℃的条件下发酵2～8天，即可。 

步骤（1）中，所述日沟维肠杆菌是保藏号：CCTCC NO:M2013184的日沟维肠杆菌Enterobacter gergoviae zxy-15。 

步骤（1）中，所述种子液由如下方法制备：在20ml牛肉膏蛋白胨液体培养基中接种2-3环日沟维肠杆菌，37℃、200r/min下振荡培养10～14h，即可。 

步骤（2）中，本发明方法的处理对象可以是未脱油的麻疯树饼粕，也可以是脱油后的饼粕。未脱油饼粕可按照如下方法制备：取麻疯树种仁，粉碎，过40目筛，即可；脱油饼粕可按照如下两种方法制备：1、将干燥麻疯树种仁粉碎过40目筛，按照索氏脱油方法脱油，即得；2、将干燥麻疯树种仁粉碎过40目筛，采取榨油机榨取的方法脱油，即得。 

步骤（2）中，所述料水比为1:0.8（w/v）；所述种子液的接种量为麻疯树饼粕的25%（v/w）。 

步骤（2）中，所述麻疯树饼粕中添加有碳源，碳源的添加量为麻疯树饼粕的10～20%（w/w），所述碳源为葡萄糖、蔗糖或可溶性淀粉。 

步骤（3）中，所述温度为36～37℃；所述发酵的时间为8天。