[发明专利]高效异源表达白圆弧青霉脂肪酶的毕赤酵母及产酶培养基

权利要求书

1.含自身前导肽的白圆弧青霉脂肪酶Pro-ALIP，其氨基酸序列为：

a）SEQ ID No.2所示的氨基酸序列；

b）SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经替换、缺失、或添加一个或几个氨基酸残基形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.编码权利要求1所述白圆弧青霉脂肪酶Pro-ALIP的基因。

3.如权利要求2所述的基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

4.含有权利要求2或3所述基因的重组载体。

5.如权利要求4所述的重组载体，其为pPICZαA-pro-alip。

6.权利要求4或5所述重组载体转化的宿主细胞。

7.如权利要求6所述的宿主细胞，其为巴斯德毕赤酵母X-33。

8.一种制备权利要求1所述含自身前导肽的白圆弧青霉脂肪酶Pro-ALIP的方法，其通过培养权利要求6或7所述的宿主细胞，诱导含前导肽的脂肪酶基因表达获得含前导肽的白圆弧青霉脂肪酶Pro-ALIP。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，培养所述宿主细胞的一种产酶培养基，其包括以下成分：酵母提取物8～12g/L、蛋白胨15～25g/L、NaH₂PO₄·2H₂O5.7～7.7g/L、Na₂HPO₄·12H₂O19.66～21.66g/L、甲醇8～12mL/L、KH₂PO₄0.75～0.95g/L、K₂HPO₄0.12～0.18g/L、NaCl0.08～0.12g/L、CaCl₂0.08～0.12g/L、MgSO₄0.4～0.6g/L。

10.如权利要求8或9所述的方法，其特征在于，采用摇瓶培养所述的宿主细胞，其培养条件为24℃，初始pH为8.0，每12小时补充一次诱导物甲醇，至甲醇终浓度为0.5％，200rpm培养120～190h。

11.权利要求1所述含自身前导肽的白圆弧青霉脂肪酶Pro-ALIP在催化水解虾青素酯制备虾青素单体中的应用。