[发明专利]HTNV-Gn/Gc特异性CTL表位肽及其聚合物和应用

说明书

技术领域

本发明属于汉滩病毒的防治技术领域，涉及HLA-A*02限制的HTNV-Gn/Gc特异性CTL表位肽及其应用。

背景技术

汉滩病毒（hantaan virus,HTNV）是布尼亚病毒科汉坦病毒属的原型，也是世界《禁止生物武器公约》议定书核查范围中的重要病原微生物之一。1976年李镐汪等首先分离出的HTNV76-118株是HTNV的代表株，也是在我国引起肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS）的主要病原体之一。HFRS是一种以发热、出血和急性肾功能损害为特征的自然疫源性疾病，其发病机理尚不清楚。在各种病毒感染性出血热疾病中，HFRS目前是世界上分布最广，发病人数最多且危害极大的一种疾病。在我国，HFRS是仅次于病毒性肝炎的危害最大的病毒性传染病，按照《中华人民共和国传染病防治法》的规定为乙类传染病。鼠类为HTNV的自然宿主和主要传染源，传播方式多种多样，传播途径包括呼吸道、消化道、皮肤粘膜、媒介和垂直传播等多种方式。人群对HTNV有较普遍的易感性，在人口密集、带病毒鼠数量多的条件下容易出现爆发和流行。HFRS的主要临床表现包括发热、全身中毒症状、毛细血管损害及急性肾功能损伤，严重者通常出现低血压休克并容易在此阶段死亡。全球每年HFRS发病人数达10万例，死亡率在5%～15%左右，90%以上病例发生在我国。HFRS在我国分布广，发病率和病死率较高，并且新疫区仍不断出现，在广大农村、城镇和林区部分疫点还时有爆发，严重危害我国人民的生命和健康，威胁和影响工农业生产、经济开发、外贸及旅游事业的发展，是国家重点防治的传染病之一。

HTNV为单股负链RNA有包膜病毒，成熟的HTNV颗粒具有多形性，基因组位于病毒的核心部分，包括大（L）、中（M）、小（S）三个基因片段，其中L片段编码RNA聚合酶，M片段编码包膜糖蛋白n（glycoprotein,Gn）和Gc，S片段编码核蛋白（nucleocapsid protein，NP）。M基因片段全长3.6～3.7kb，仅包含一个有意义的长开放阅读框，编码包含Gn和Gc两个前体蛋白。其mRNA的蛋白质编码顺序为5’-Gn-Gc-3’，其中间部位有一个由5个氨基酸残基（WAASA）组成的共翻译切割位点，前体蛋白在细胞的内质网内切割并加工成为Gn和Gc两个蛋白。HTNV-Gn/Gc全长包含1135个氨基酸，未糖基化的Gn、Gc分子量分别为64kD和54kD。HTNV-Gn/Gc位于HTNV的囊膜表面，可刺激机体产生特异性的中和抗体，同时Gn/Gc还可诱导动物产生保护性细胞免疫应答，表明Gn/Gc上一定存在T细胞抗原位点，可诱导T细胞免疫应答。

在病毒感染过程中，T细胞通过识别抗原提呈细胞（antigen presenting cell,APC）表面的主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC）-Ⅰ类或Ⅱ类分子与抗原肽表位形成的复合体，发挥清除病原体的效应。CD8⁺T细胞（细胞毒性T细胞，cytotoxic T lymphocyte,CTL）是抗病毒免疫的主要效应细胞，CD8⁺T细胞可通过TCR识别已被处理并结合到MHC-Ⅰ类分子上并表达于宿主细胞表面的病毒抗原，长度多为8-10个氨基酸，通过分泌颗粒酶和穿孔素杀伤靶细胞，或通过受体配体相互作用（如Fas-FasL）诱导靶细胞程序性死亡，从而清除已被病毒感染的细胞，限制病毒的复制和扩散。尽管细胞免疫应答在HFRS发生、发展和疾病的转归中起着重要作用，但迄今为止，对HTNV-Gn/Gc上的T细胞表位的研究只有零星报道。这种研究现状大大限制了人们对HTNV感染后适应性免疫应答规律及其与免疫保护或免疫损伤关系的认识，也限制了人们利用多肽疫苗对疾病进行治疗及控制的研究。