[发明专利]与gp41蛋白结合的多肽、多肽芯片、其制备方法和应用有效
申请号: | 201310298420.8 | 申请日: | 2013-07-16 |
公开(公告)号: | CN104292303B | 公开(公告)日: | 2017-03-01 |
发明(设计)人: | 王琛;王晨轩;王艳梅;朱劲松;杨延莲 | 申请(专利权)人: | 国家纳米科学中心 |
主分类号: | C07K7/08 | 分类号: | C07K7/08;C07K7/06;C07K14/00;C40B40/10;C40B50/14;G01N21/55 |
代理公司: | 北京品源专利代理有限公司11332 | 代理人: | 巩克栋 |
地址: | 100190 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | gp41 蛋白 结合 多肽 芯片 制备 方法 应用 | ||
1.一种与gp41蛋白结合的多肽,其特征在于,所述多肽具有选自SEQ ID NO:1~7所示的氨基酸序列。
2.一种多肽芯片,其特征在于,所述多肽芯片包括固定于固相载体上的、能够与gp41蛋白结合的多肽,所述多肽具有选自SEQ ID NO:1~7所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的多肽芯片,其特征在于,所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1~7所示。
4.一种如权利要求2或3所述的多肽芯片的制备方法,其特征在于,所述方法包括:
(1)对固相载体进行预处理,形成备用固相载体;
(2)将稀释好的所述多肽点样到所述备用固相载体上。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)具体包括:
(1a)在SPR芯片表面通过共价键,修饰上一层含羧基的硫醇分子自组装层;
(1b)以乙醇清洗SPR芯片表面两次;
(1c)使用碳二亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺活化SPR芯片表面,使醇分子自组装层上的羧基形成不稳定的琥珀酰亚胺酯;
(1d)以乙醇清洗SPR芯片表面两次。
6.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)还包括对所述多肽进行预处理,及点样后的处理;具体地,所述步骤(2)包括:
(2a)将链霉亲和素与N端修饰生物素的多肽分子按摩尔比为1:1的比例混合,且混合后链霉亲和素的质量浓度为1mg/mL,形成链霉亲和素-多肽混合液;
(2b)将0.2μL链霉亲和素-多肽混合液滴在SPR芯片表面,以gp41的单克隆抗体作为阳性对照,取0.2μL滴在SPR芯片表面;
(2c)以乙醇胺封闭表面未参与反应的琥珀酰亚胺酯与双硫醇上的羧基;
(2d)以乙醇清洗SPR芯片表面两次;
(2e)将SPR芯片用微流控膜封装,装入SPR仪器中;
(2f)以0.5%(体积比)磷酸与1×PBS反复交替清洗SPR芯片表面,直到SPR芯片表面的固定相SPR信号保持平稳为止;
(2g)以1×PBS作为解离相,以0.5%(体积比)磷酸作为重生液,测试SPR芯片对gp41的1×PBS溶液的响应。
7.一种药物组合物,其特征在于,所述药物组合物包含如权利要求1所述的多肽。
8.一种如权利要求1所述的多肽、如权利要求2或3所述的多肽芯片或如权利要求7所述的药物组合物在制备用于诊断或辅助性诊断HIV感染引起的疾病的药物中的应用。
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