[发明专利]与gp120蛋白结合的多肽、多肽芯片、其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及与gp120蛋白结合的多肽、多肽芯片、其制备方法和应用。

背景技术

获得性免疫缺陷综合征（Acquired Immune Deficiency Syndrome，AIDS）是因为感染人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）而导致免疫缺陷，并发一系列机会性感染及肿瘤等的综合征。它是一类流行较广，致死率高的疾病。在当前仍然缺少普适的治疗方法的情况下，尽早地发现人类免疫缺陷病毒，及时地诊断病症，阻断传播途径，对于减少其危害有着重要的意义。

HIV可以感染多种细胞，包括在表面表达CD4分子的T4淋巴细胞、单核巨噬细胞和树突状细胞等。CD4分子是HIV入侵细胞的受体，而糖蛋白gp120在HIV识别CD4分子的过程中，发挥着重要的作用。位于HIV囊膜上的gp120分子会与CD4分子结合，使跨膜糖蛋白gp41发生构象转变。gp41使HIV与靶细胞膜融合，从而病毒的核衣壳进入细胞。此外，游离的gp120分子还能激活体内过量的T细胞及其他的主要免疫细胞，加速HIV病毒的入侵。故gp120分子可能是诊断HIV相关疾病的重要靶标分子。以gp120分子为药物设计靶点，可能是实现对HIV有效检测与治疗免疫缺陷综合征的一种途径。

基于gp120的分子结构，目前已经开发出了多种相关的抑制剂与单克隆抗体，并有些基于这些抗体的芯片产生。但是目前用于检测gp120蛋白的单克隆抗体芯片存在以下问题：

（1）使用的单克隆抗体与gp120蛋白的相互作用力较弱，造成对gp120蛋白的检出限较低，传统的gp120单克隆抗体制备的芯片检出限高于35nM；

（2）由于仅基于一种或少数几种gp120单克隆抗体的阳性结果进行判断，导致实验过程中较多假阳性结果的产生；

（3）gp120单克隆抗体芯片很容易因抗体的构象变化导致抗体失活，芯片失效；

（4）gp120单克隆抗体的成本较高，导致gp120单克隆抗体芯片的成本难以降低，大规模应用受到限制。

因此，针对gp120蛋白，开发出检出限低、特异性高、性能稳定及成本较低的芯片，对于HIV病毒的检测具有重要意义。

发明内容

本发明人经过大量实验和创造性劳动，得到了一组多肽，并发现这组多肽与gp120蛋白有很强的特异性结合能力，能够制备成多肽芯片或药物组合物等，应用于诊断或辅助性诊断HIV感染引起的疾病。

本发明提供以下技术方案：

在第一方面，本发明提供一种与gp120蛋白结合的多肽，所述多肽具有选自SEQ ID NO：1～9所示的氨基酸序列：

（1）GGSRADAYRTRVDN（SEQ ID NO：1）；

（2）GGTDACVPTRPNPQRV（SEQ ID NO：2）；

（3）GGSLWRQSLDPCV（SEQ ID NO：3）；

（4）GGVDLTPLCVSLDCTRLDN（SEQ ID NO：4）；

（5）GGPDVSFRPIPIDY（SEQ ID NO：5）；

（6）GGLARRRVVIDSANFTRNADTII（SEQ ID NO：6）；

（7）GGNNDTIIFDQSSGGRPRIVTDS（SEQ ID NO：7）；

（8）GGCDIDQIINMWQDVGDAMY（SEQ ID NO：8）；和

（9）GGSRIFDPGGGRM（SEQ ID NO：9）。

所述多肽可以通过人工化学合成制得，其与gp120蛋白有很强的特异性结合能力。

在第二方面，本发明提供一种多肽芯片，其包括固定于固相载体上的、能够与gp120蛋白结合的多肽，所述多肽具有选自SEQ ID NO：1～9所示的氨基酸序列。

所述多肽芯片上的多肽与gp120蛋白有很强的特异性结合能力，可以用于gp120蛋白的检测，并据此判断HIV病毒的感染情况。

在本发明一个实施方案中，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1～9所示，即包含上述九条多肽。

在第三方面，本发明提供一种如第二方面所述的多肽芯片的制备方法，利用表面等离激元共振(Surface Plasmon Resonance，SPR)原理，所述方法包括：

（1）对固相载体进行预处理，形成备用固相载体；

（2）将稀释好的所述多肽点样到所述备用固相载体上。