[发明专利]杨属派间不同种亲缘关系的鉴定方法及鉴定试剂盒有效
| 申请号： | 201310298553.5 | 申请日： | 2013-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN104293887A | 公开（公告）日： | 2015-01-21 |
| 发明（设计）人： | 张德强;杜庆章;潘炜 | 申请（专利权）人： | 北京林业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京康信知识产权代理有限责任公司 11240 | 代理人： | 吴贵明;张永明 |
| 地址： | 100083 北京市海淀*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 杨属派间不 同种 亲缘 关系 鉴定 方法 试剂盒 | ||
1.一种杨属派间不同种亲缘关系的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，采用多态性微卫星DNA引物对对杨树进行基因分型，构建种间个体的微卫星DNA指纹图谱；
S2，采用所述多态性微卫星DNA引物对对待鉴定杨树进行基因型扩增，并根据所述微卫星DNA指纹图谱判断所述待鉴定杨树的亲缘关系；
其中，所述多态性微卫星DNA引物对包括：引物对1、引物对2、引物对3、引物对4和引物对5，所述引物对1的碱基序列为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；所述引物对2的碱基序列为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；所述引物对3的碱基序列为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；所述引物对4的碱基序列为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；所述引物对5的碱基序列为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10。
2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述多态性微卫星DNA引物对中的正向引物的5’端采用荧光基团修饰，所述荧光基团选自FAM、HEX或ROX中的一种。
3.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤S1进一步包括：
提取各待鉴定杨树DNA，
采用所述多态性微卫星DNA引物对分别对各所述待鉴定杨树DNA进行PCR扩增，得PCR扩增产物；
将所述PCR扩增产物进行毛细电泳检测，并将所述毛细电泳检测的结果进行聚类分析，构建所述微卫星DNA指纹图谱。
4.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增的条件是：94℃预变性5min，94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环，然后72℃延伸10min。
5.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增的体系为：所述多态性微卫星DNA引物对的浓度均为0.3mol/μl，3.5μl2×PCR QIAGEN Multiplxe PCR Master Mix，2.0μl DNA模板，无菌水补至10μl。
6.一种杨属派间不同种亲缘关系的鉴定试剂盒，其特征在于，包括多态性微卫星DNA引物对，所述多态性微卫星DNA引物对包括：引物对1、引物对2、引物对3、引物对4和引物对5，所述引物对1的碱基序列为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；所述引物对2的碱基序列为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；所述引物对3的碱基序列为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；所述引物对4的碱基序列为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；所述引物对5的碱基序列为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10。
7.根据权利要求6所述的鉴定试剂盒，其特征在于，所述多态性微卫星DNA引物对中的正向引物的5’端采用荧光基团修饰，所述荧光基团选自FAM、HEX或ROX中的一种。
8.根据权利要求6所述的鉴定试剂盒，其特征在于，所述多态性微卫星DNA引物对进行PCR扩增的条件是：94℃预变性5min，94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环，然后72℃延伸10min。
9.根据权利要求6所述的鉴定试剂盒，其特征在于，所述多态性微卫星DNA引物对进行PCR扩增的体系为：所述多态性微卫星DNA引物对的浓度均为0.3mol/μl，3.5μl2×PCRQIAGEN Multiplxe PCR Master Mix，2.0μl DNA模板，无菌水补至10μl。
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