[发明专利]建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种癌细胞原位模型建立的方法，特别涉及建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型的方法。

背景技术

乳腺癌是女性排名第一的常见恶性肿瘤，由于该肿瘤疾病的研究不能直接在肿瘤患者体内进行，但可借助实验动物来完成，一般是通过C₃H小鼠进行活体动物实验（C₃H小鼠与免疫缺陷小鼠相比并不具有免疫缺陷）。

实验动物肿瘤模型是抗肿瘤药物实验必不可缺的一个工具。目前用于肿瘤研究的动物模型有三种：移植肿瘤原位模型、自发肿瘤模型和诱发肿瘤模型，后两种肿瘤模型成瘤速率慢，周期长，难于在短时间内获得大量肿瘤模型，故较少被用于抗肿瘤药物的筛选实验。

目前，移植肿瘤原位模型因易于定量、接种时间的限制很难有效控制实验所需要的肿瘤模型成瘤速率、周期和动物各种品系间难以克服的移植排斥反应、所以急需一种能满足大量可复制的移植肿瘤原位模型建立方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种成瘤率高、成瘤时间短、费用低的建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型的方法，包括以下步骤：

a）在无菌条件下切取小鼠自发乳腺癌瘤块，用无菌的缓冲液清洗3—4遍；

b）将瘤块分割成体积为0.7mm³—1.9mm³接种瘤块；

c）瘤块接种于无肿瘤的小鼠前肢腋窝皮下；

d）常规条件下饲养，正常繁殖9—21天，完成建立小鼠可移植乳腺癌原位模型。

此方法中的缓冲液为磷酸盐缓冲液，含磷酸二氢钾(KH₂PO₄）：0.24g/L，磷酸氢二钠(Na₂HPO₄）：1.440g/L，氯化钠(NaCl）：8.006g/L，氯化钾(KCl）：0.201g/L，加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，定容到1L，最后高温高压灭菌后室温保存。

采用这种方法，该模型将小鼠自发乳腺癌瘤块分割成体积较小的接种瘤块直接接种在实验小鼠的前肢腋窝皮下，模拟了乳腺癌细胞在小鼠体内生长过程，整个模型建立工序简单，没有过高的实验环境要求，而且成瘤率发生率达85％—100％，成瘤时间短，因此可以广泛被采用在研究乳腺癌治疗的实验中。

具体实施方式

下面结合具体实施方式来介绍本发明的建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型的方法。

首先选择近交系C₃H小鼠，雌性，6周龄，重量16—22g，常规条件下饲养，包括通风、洁净、恒温、自由进食、饮水，并保证正常繁殖。

再C₃H小鼠在饲养10个月后，有雌鼠前肢腋下出现肿块并逐渐增大，经病理学检查证实为自发性乳腺癌。将该小鼠自发乳腺癌瘤块作为瘤源进行同种属C₃H移植接种。

配制磷酸盐缓冲液，含磷酸二氢钾(KH₂PO₄）：0.24g/L，磷酸氢二钠(Na₂HPO₄）：1.440g/L，氯化钠(NaCl）：8.006g/L，氯化钾(KCl）：0.201g/L，加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，定容到1L，最后高温高压灭菌后室温保存。

将相同寿命在4—5周正常生长的140只C₃H小鼠分为A、B、C、D、E、F、G七组，每组小鼠的数量为20只。

实施例一

按以下步骤建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型：

a）在无菌条件下切取小鼠自发乳腺癌瘤块，用无菌的磷酸盐缓冲液清洗3遍；

b）将瘤块分割成体积为0.7mm³接种瘤块；

c）选取A组的20只C₃H小鼠，在小鼠前肢腋窝剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下，瘤块接种于小鼠前肢腋窝皮下；

d）常规条件下饲养，正常繁殖21天，完成建立小鼠可移植乳腺癌原位模型。

经过上述步骤A组的20只小鼠接种植后７—９天后，其中17只小鼠接种局部肿瘤结节形成，９—21天中其中17只小鼠瘤体生长速度较快，瘤体体积开始增大，小鼠的成瘤率为85%。

实施例二

按以下步骤建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型：