[发明专利]一种可视化跟踪的家蚕生物反应器快速表达NS1蛋白的方法

权利要求书

1.一种可视化跟踪的家蚕生物反应器快速表达NS1蛋白的方法，其特征在于，构建携带有egfp表达盒和ns1基因表达盒的供体质粒，用该供体质粒转化大肠杆菌DH10B感受态细胞，供体质粒序列上Tn7R-Tn7L之间的egfp表达盒和ns1基因表达盒可特异性转座到Bm-Bacmid载体上，构建表达egfp和ns1基因的整合型重组真核表达载体，将其转染昆虫细胞后产生的重组芽生型BV病毒粒子感染家蚕，通过可视化的绿色荧光信号实时监测家蚕体内病毒增殖的情况。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的供体质粒通过下列步骤构建：(1)以家蚕杆状病毒BmNPV基因组为模板，通过IE1-F/IE1-R扩增得到一个560bp的DNA片段，对扩增产物进行SnaB I和BamH I双酶切，将酶切后的回收产物与经过同样双酶切的质粒pFastHTB进行连接，产生重组质粒pFastHTB-P_ie1；(2)以EGFP-F和EGFP-R，从pMD18T-egfp质粒中扩增得到720bp的egfp基因全长，对该扩增产物进行BamH I/ Kpn I双酶切，将酶切回收后的DNA片段与经同样双酶切的pFastHTB-P_ie1进行连接，得到重组质粒pFastHTB-P_ie1-egfp；(3)通过IE1-EGFP-SV40-F和IE1-EGFP-SV40-R，从pFastHTB-P_ie1-egfp扩增得到1544bp的egfp表达盒：P_ie1-egfp-sv40，对P_ie1-egfp-sv40进行EcoR I/SnaB I双酶切，将酶切后的回收产物与经过同样双酶切的pFastBacI进行连接，得到(4)以Pph-F和Pph-R为引物，从pFastHTB质粒中特异性的扩增232bp的P_polh-6×His-TEV序列，对扩增产物进行Spe I和Xba I进行双酶切，将酶切回收产物与经同样双酶切的进行连接，得到(5)通过ns1-F和ns1-R从pMD18T-ns1质粒中扩增得到951bp的ns1基因，对扩增得到的ns1基因进行Nhe I(与Xba I互为同尾酶)和Xho I双酶切，对回收后的DNA片段与经过Xba I和Xho I酶切的进行连接，得到由于该质粒在ns1基因下游同样具有一个加尾信号sv40序列，因此把该质粒命名为