[发明专利]一种小分子抗体亲和肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地，本发明涉及一种抗体高选择性小分子抗体亲和肽及其应用。

背景技术

免疫球蛋白IgG，即抗体是一种特殊的蛋白质分子，被作为体外诊断的试剂、治疗疾病的药物、免疫亲和层析的配基等，在生命科学研究、生物技术及医学领域中有着广泛的应用。

目前，IgG的分离纯化多采用抗体的天然亲和配体Protein A/G，由于Protein A/G存在与抗体Fc片段专一性识别的能力，使用Protein A/G亲和色谱纯化抗体，获得的产品的纯度较高。但是由于Protein A/G也属于具有活性的生物物质，因此Protein A/G分离也存在一些问题：

1）价格昂贵：因为蛋白A配基需要通过基因工程的方法生产纯化，因此生产成本高，其价格达到$10000/升亲和介质；

2）缺乏有效的清洗方法，由于蛋白A在碱性环境下不稳定，因此不能使用一般的氢氧化钠原位清洗法；

3）由于配基也属于蛋白质，易被存在原料液中的蛋白酶水解，从而降低分离效果；

4）与一般的化学配基相比，蛋白A色谱的使用生命周期较短；

5）配基易脱落，脱落的蛋白A会引起人的免疫反应且在临床上已经证实对人体有毒害；

6）洗脱pH较低（pH2-3），易引起一些抗体失活或者出现聚集，常常需要边收集产品，边中和，增加操作的复杂度。

对于抗体的分离纯化，也有很多研究者尝试使用小分子化合物作为配体，也取得的了一定的效果，但是目前的小分子化合物配体也存在一些问题：

1）生理毒性：目前的小分子化合物配体多含有杂环，具有一定毒性。例如，4-巯基-乙基吡啶（MEP），其对小鼠50%致死量为178mg/kg。

2）亲和性差：目前的小分子化合物配体亲和力通常较Protein A/G低。

3）选择性差：目前的小分子化合物配体在结合IgG的同时也会与主要分离杂质HAS（人血清白蛋白）结合。

所以，目前IgG的分离纯化缺乏一种高效安全经济的亲和配体。

发明内容

本发明的目的在于针对上述问题，提供一种小分子抗体亲和肽作为亲和配体，实现高效安全经济的IgG分离纯化。

本发明的另一目的是提供上述小分子抗体亲和肽的应用。

本发明的小分子抗体亲和肽，其氨基酸序列如SEQ ID No.1-54中的任一项所示。

进一步地，根据本发明的小分子抗体亲和肽，其结构特征，自N端至C端如下：

NH₂-R¹-R²-R³-R⁴-COOH，

其中，R¹为苏氨酸（Thr）或谷氨酸（Glu）或门冬氨酸（Asp），R²为苏氨酸（Thr）或谷氨酸（Glu）或门冬氨酸（Asp），R³为谷氨酸（Glu）或门冬氨酸（Asp）或脯氨酸（Pro），R⁴为半胱氨酸（Cys）或甘氨酸（Gly）。也可以理解为R¹和R²为酸性氨基酸及其衍生物，R³为酸性氨基酸或脯氨酸，R⁴为半胱氨酸（Cys）或甘氨酸（Gly）。

根据本发明的小分子抗体亲和肽，所述小分子抗体亲和肽与人免疫球蛋白IgG的Fc片段结合，并且其不与人血清白蛋白HSA结合。

进一步的，本发明通过将所述的小分子肽偶联于载体以分离纯化免疫球蛋白IgG。

本发明提供了一种小分子抗体亲和肽，用于分离纯化免疫球蛋白IgG，通过将所述的小分子肽偶联于不同的载体可以实现不同条件下免疫球蛋白IgG的分离或纯化，例如将该小分子肽偶联于琼脂糖凝胶，可以制备亲和层析柱纯化免疫球蛋白IgG；而将该小分子肽偶联于透析器的中空纤维膜，则可应用于自身免疫性疾病的血液净化治疗，选择性的清除致病IgG。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：