[发明专利]miR-375的应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药和生物技术领域，具体为用miRNA制备和筛选治疗肾上腺肿瘤的药物及诊断试剂。 

背景技术

近年来，随着表观遗传学的兴起，越来越多的研究开始关注非编码核糖核酸（noncoding RNA,ncRNA），其中的microRNA(miRNA)更成为发育、代谢、肿瘤等各个领域的新兴研究热点。microRNAs(miRNAs)是一类长约19-25个核苷酸大小的在进化上非常保守的内源性非编码RNA，通过转录后调控对靶基因的表达水平产生影响；microRNAs在动植物和微生物中广泛存在，由DNA经RNA聚合酶II或III转录生成前体miRNA（pri-miRNA），之后pri-miRNA被Drosha酶切割形成长度大约70-100碱基的、具发夹结构的pre-miRNA。这些发夹结构的RNA被核输出蛋白exportin5转运到细胞质，再被胞浆中的Dicer酶切割形成成熟的miRNAs产物，同Ago2、TRBP等蛋白一起形成RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complex,RISC）。它们通过同靶基因mRNA的3’端非翻译区（3’untranslated region,3’UTR）的碱基完全或不完全配对，引起靶基因mRNA的降解和/或抑制该mRNA的翻译，从而直接抑制蛋白质的表达。近几年来通过高通量测序等研究方法，已发现了上千种可编码miRNA的基因，而超过30%的编码蛋白质基因受到这些miRNA的调控。 

自2002年Calin等人首次报道了在慢性淋巴细胞白血病中存在miR-15及miR-16的表达缺失及下调，miRNA在肿瘤发生、发展中的作用及对肿瘤治疗疗效、预后判断的影响逐渐为人们所认识。现已有大量文献报道了在乳腺癌、胃癌、肺癌、前列腺癌、肝癌等多种肿瘤性疾病中miRNA表达的异常及其调控机制，其或扮演了原癌基因或抑癌基因的角色。而miRNA在内分泌相关代谢和肿瘤发生过程中的功能也已成为了研究热点，如在胰腺癌，甲状腺、垂体、卵巢肿 瘤中均可见miRNAs表达异常的相关报道。在肾上腺疾病中，对于基因表达差异及其与疾病和预后的相关性也有一些研究报道近期有研究报道了嗜铬细胞瘤、库欣综合征、肾上腺皮质癌等肾上腺肿瘤组织中miRNA的表达差异，而对于原醛症，尚未见任何报道研究非编码RNA的表达和功能，其中对于肾上腺皮质细胞增生的机制研究更加缺少。相较其他肿瘤的研究情况，这在很大程度上制约了人们对原醛症的认识，限制了诊断和治疗技术手段的发展。越来越多证据显示，miRNA参与了肿瘤生物学行为的多个环节。 

发明内容

本发明旨在将miR-375应用于制备或筛选治疗肾上腺肿瘤的药物。 

本发明还将miR-375应用于制备或筛选治疗肾上腺皮质癌的药物。 

本发明还将miR-375应用于制备或筛选调控或肾上腺皮质癌细胞增殖的药物。 

通过体外实验研究miRNA-375（miR-375）对肾上腺皮质癌细胞增殖的影响。在人H295R细胞系上以mimics瞬时转染，使miR-375过表达，利用CCK-8，EDU染色观察miRNA过表达导致的细胞增殖变化。 

结果显示，miR-375过表达可抑制肾上腺皮质癌细胞系H295R增殖。 

因此，miR-375对于肾上腺皮质癌细胞的增殖有调控作用，可用于制备筛选肾上腺皮质癌或肾上腺肿瘤的药物。 

本发明确定了miR-375与肾上腺皮质癌细胞增殖的关系，可将miR-375作为筛选的指标，通过检测mi-375的表达水平，来筛选制备治疗肾上腺肿瘤尤其是治疗肾上腺皮质癌的药物、或者是调控肾上腺皮质癌细胞增殖的药物。 

附图说明

图1的A-E为实施例3中，原发性醛固酮增多症中腺瘤、结节样增生组织及正常对照组织中miRNA-375、miRNA-7、miRNA-29a、miRNA-29b和miRNA-29c的表达差异。 

图2为实施例5中，在H295R瞬时转染mimic时miR-375表达情况 

图3为实施例5中，在H295R细胞系中过量表达miR-375时抑制细胞增殖的结果，A为CCK8检测结果，B为EDU染色情况。 

具体实施方式

实施例1 

确诊为原发性醛固酮增多症并行手术治疗的患者128例 

I.筛查对象选择标准：