[发明专利]枯草芽孢杆菌BS01在改善睡眠中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株枯草芽孢杆菌BS01的新用途，特别是涉及其在改善睡眠领域的用途。 

背景技术

失眠症是临床上一种常见的可治性疾病,其临床症状表现为入睡困难、中途醒转增多、早醒。据1999年10月在德国召开的第三届世界睡眠联合协会大会多份流行病学调查资料统计表明，全球每10～12人中约有1人患失眠。专家预测，到2020年大约有逾7亿失眠者。据不完全统计，在我国约有45%的公民存在睡眠障碍，并且《中国居民的睡眠时间分析》的一研究项目指出，我国成年人中睡眠时间不足或睡眠时间过多的现象十分普遍。因此，研制改善睡眠功能的产品具有广泛的社会意义。 

然而，目前改善睡眠的方法研究多集中在安定、褪黑素、苯二氮卓类、非苯二氮卓类(如扎来普隆、唑吡坦、曲唑酮等)、细胞因子及植物提取物等方面。这些物质虽然具有一定的效果，但长期服用会产生依赖性与毒副作用。研制既安全有效又绿色环保的改善睡眠的制品成为当前医学研究中的一个重要课题。 

国内外关于枯草芽孢杆菌的研究与应用已有100多年的历史,在工业、农业、食品、医药和饲料等行业被广泛应用。目前已有研究表明芽孢杆菌具有提高动物生产性能、增加饲料利用率、促进机体免疫、抗菌防病及促进动物胃肠道微生态平衡等功效，但目前国内外还未有对其改善睡眠方面的相关报道，也尚未见到相关产品。 

发明内容

本发明人对枯草芽孢杆菌BS01CCTCC NO:M2012485作了进一步研究，通过动物试验发现，本发明枯草芽孢杆菌BS01不仅具有调节肠道微生态平衡、提高免疫力的作用，而且还具有改善睡眠的功效。因而，本发明的目的在于针对现有技术的不足提供一株枯草芽孢杆菌BS01 CCTCC NO:M2012485在制备改善睡眠制品中的应用。其中，改善睡眠的制品可以是药品、保健品或饮食品。 

附图说明

图1为本发明“枯草芽孢杆菌BS01CCTCC NO:M2012485”饲喂小鼠的粪样细菌16S rRNA PCR扩增结果的琼脂糖凝胶电泳图。该图中，Marker为D2000，NC为阴性对照，PCR扩增得到200bp左右的16S rRNA V3区片段。 

图2为本发明“枯草芽孢杆菌BS01CCTCC NO:M2012485”饲喂小鼠的粪样细菌16S rRNA PCR扩增结果DGGE图谱。其中，A1-A5为第0、7、14、21、28天对照组；B1-B5为第0、7、14、21、28天低剂量组；C1-C5为第0、7、14、21、28天中剂量组；D1-D5为第0、7、14、21、28天高剂量组。 

图3为本发明“枯草芽孢杆菌BS01CCTCC NO:M2012485”饲喂小鼠粪样细菌区系DGGE图谱聚类分析图。 

具体实施方式

本发明根据国家保健食品管理法规的有关规定，采用昆明小鼠，在饲喂基础日粮的同时分别饲喂不同剂量的枯草芽孢杆菌BS01CCTCC NO: M2012485，以饲喂生理盐水的小鼠作为对照，在试验前后分别称量其体重，测定睡眠时间、阈下催眠入睡率、以及肠道菌群数等来判断该菌株是否有改善睡眠以及调节肠道微生态平衡的功效。 

样品:枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BS01（由四川农业大学动物微生态中心提供，于2012年11月28日保藏于湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为:CCTCC NO:M2012485）。 

实验动物:选用四川农业大学隆鼠家园繁殖的雄性清洁级昆明系小鼠48只(体重为20.0±0.5g),随机分为四组，每组12只。 

灌胃剂量：分别设计高、中、低三个剂量组，分别灌胃活菌数为1.0×10⁵ CFU /g、1.0×10⁶CFU/g、1.0×10⁷CFU/g的枯草芽孢杆菌BS01，小鼠灌胃剂量为10mL / kg.bw。 

主要仪器:高速冷冻离心机 ；AL204电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。 

动物房条件：温度为23±2℃，1周更换2-3次锯末粉，每天12小时光照。 

饲喂饲料：常规饲料（由四川农业大学隆鼠家园提供）。 

日常管理：小鼠自由进水进食，每天16:00进行灌胃并记录饲料消耗量。 

数据处理：用SPSS19.0 软件对数据进行方差分析，用LSD进行多重比较。结果用“平均值±标准差”表示。 

以下结合实施例和试验数据，对本发明发的技术特征和优点作更详细的说明。